Fluoreszenzspektroskopie an individuellen Hämocyaninmolekülen zur Untersuchung von sauerstoffabhängigen Konformationsänderungen

在这种情况下，我们可以从以下几个方面着手解决这一问题。Während Diese Frage Bisher Examentell Nur am Ensymble von Proteinmolekülen untersute Konnte，erlabt die Technische Entwickung der letzten Jahre Einen Methodisch Neuen Anatz：die Untersuadung der Koop ativen ven Wechselwirkung an Einzelnen Proteelnen-Komplexen.从整体上消除这些错误，使之成为一种新的机械师。在理想的模蛋白für Unsere Untersuhungen和24只海蓝蛋白的Vogelspne Eurypelma calforNicum。Es bindet 24 Moleküle Sauerstoff hochkoopativ，Wo bebe die Bindung von Sauerstoff MIT einem about in Fluoreszenziniteät der etwa 200 Tryptophane Pro 24 mer line korrelert.Zur分析Einzelner，固定化蛋白-Komplexe soll die Folreszenz Dieser Intrinsischen Tryptophane MIT Einem Lokal Hochauflösenden Flureszenzmikroskop detektiert。它们是2-Photonen-Anregung konzipiert，Um die Schwierigkeiten be der der direkten Anrekten im UV-Bereich zu umgehen.

Die Form der Kommunikation zwischen den Untereinheiten in kooperativen, multimeren Makromolekülen wie z.B. dem tetrameren Hämoglobin ist ein Problem, das seit Jahrzehnten intensiv diskutiert wird. Während diese Frage bisher experimentell nur am Ensemble von Proteinmolekülen untersucht werden konnte, erlaubt die technische Entwicklung der letzten Jahre einen methodisch neuen Ansatz: die Untersuchung der kooperativen Wechselwirkung an einzelnen Protein-Komplexen. Die dadurch erzielte Eliminierung der Ensemblemittelung sollte es ermöglichen, zwischen konzentrierten und sequentiellen Mechanismen für die Konformationsübergänge zu unterscheiden. Ein ideales Modellprotein für unsere Untersuchungen ist das 24-mere Hämocyanin der Vogelspinne Eurypelma californicum. Es bindet 24 Moleküle Sauerstoff hochkooperativ, wobei die Bindung von Sauerstoff mit einem Abfall der Fluoreszenzintensität der etwa 200 Tryptophane pro 24mer linear korreliert. Zur Analyse einzelner, immobilisierter Protein-Komplexe soll die Fluoreszenz dieser intrinsischen Tryptophane mit einem lokal hochauflösenden Fluoreszenzmikroskop detektiert werden. Das Mikroskop ist für die nichtlineare 2-Photonen-Anregung konzipiert, um die Schwierigkeiten bei der direkten Anregung im UV-Bereich zu umgehen.