Analyse der alpha-Amanitin-resistenten Transkription und der Antigenen Variation bei Trypanosoma brucei

一种寄生虫布氏锥虫通过糖蛋白分子的鉴定，使其对机体的溶血性和免疫缺陷的寄生虫抗原变异产生影响。Insektenform中的蛋白质- GPEET-和EP-前环素以及Blutstromform中的“变体表面糖蛋白”（VSG）-韦尔登（Genen kodiert），其中抗Traskription的是α-Amanitin。RNA聚合酶I，对于这种特征来说，其作用是通过核糖体DNA来实现的。为了分析T.我们构建了一个brucei的体外系统，在α-Amanitin抗性的rDNA转录中，GPEET和VSG启动子有效，并得到了相应的启动子。我们将韦尔登用于转录RNA聚合酶，其组成部分包括转录因子的鉴定和功能特性。Der Schwerpunkt soll auf Faktoren liegen，die spezifisch mit dem GPEET oder dem VSG Promotor interagieren，da es für sie vermutlich kein Gegenstück in den Wirtsorganismen gibt.韦尔登通过免疫荧光和原位杂交RNA聚合酶I的组合以及在Zellkern局部的活性VSG表达来研究抗原变异的机制。

Der einzellige Parasit Trypanosoma brucei besitzt einen aus identischen Molekülen aufgebauten Glykoproteinmantel, der ihn vor lytischen Komponenten der Wirtsorganismen schützt und durch dessen antigene Variation der Parasit der Säugetier-Immunantwort entkommt. Die Proteine - GPEET- und EP-Procycline in der Insektenform und "Variant Surface Glycoprotein" (VSG) in der Blutstromform - werden von Genen kodiert, deren Traskription resistent gegebenüber a-Amanitin ist. Die RNA Polymerase I, für die diese Eigenschaft charakteristisch ist, transkribiert sonst ausschließlich die ribosomale DNA. Für die Analyse dieser einmaligen Konstellation in T. brucei haben wir ein in vitro-System entwickelt, in dem a-Amanitin-resistente Transkription an rDNA, GPEET und VSG Promotoren effizient und korrekt gestartet wird. Wir werden damit die für die Transkription verantwortliche RNA Polymerase, ihre Komponenten sowie Transkriptionsfaktoren identifizieren und funktionell charakterisieren. Der Schwerpunkt soll auf Faktoren liegen, die spezifisch mit dem GPEET oder dem VSG Promotor interagieren, da es für sie vermutlich kein Gegenstück in den Wirtsorganismen gibt. Um Aufschluß über den Mechanismus der Antigenen Variation zu bekommen, werden wir durch eine Kombination von Immunfluoreszenz und in situ-Hybridisierung RNA Polymerase I und die aktive VSG Expressionsstelle im Zellkern lokalisieren.