Biophysikalische Charakterisierung des durch NSF und Alpha-SNAP katalysierten Dissoziation von SNARE-Komplexen

snare - protein sind和allen intrazellulären Membranfusions-Vorgängen在sektorischen通路中。Man vermutet, dasß sie die ofilm fusion catalalysieren，即die in den beililigen ofilm befindlichen SNAREs ßverschlußartig zusammenlagern and dadurch den fusion fusion einleen。研究了一种稳定的杂聚物复合物（SNARE-Komplex），该复合物与atp酶的融合与NSF基金和Kofaktor - snap的更广泛的分解相结合。Während die association von SNAREs sowie die damit verbundenen Intermediate and Konformationsänderungen bereits gut verstanden sind, 1, ber den Mechanismus der NSF-vermittelten disdissociation n . wenig bekant。Man - min - an, pass NSF and snare - complex ringartig umfaßt，其中a-SNAP也是Adaptor真菌。Nachfolgend wir der snr - complex durch eine durch atp -水解angtriebenKonformationsänderung在NSF分解中的应用。在此基础上，研究了NSF基金的相互作用（Interaktion von NSF fund）。在美国国家科学基金会（NSF）的一项研究中，研究人员使用了一种新的方法来研究复合特征。Ziel等，in genaueres Bild . <s:1>蛋白质-蛋白质相互作用与蛋白质-拆卸显形的研究进展。Anschließend soll die NSF-katalysierte dis解离von snare - protein untersucht werden。大北蛋白质化学，荧光光谱分析和量钾法。[au] erdem sollen durch gezielte Verwendung definierter Mutanten sowie von nicht hydrosiberren ATP-Analoga verendende inblicke in den Mechanismus der ATPase NSF erhalten werden]。

SNARE-Proteine sind an allen intrazellulären Membranfusions-Vorgängen des sekretorischen Pathways beteiligt. Man vermutet, daß sie die Membranfusion katalysieren, wobei sich die in den beteiligten Membranen befindlichen SNAREs reißverschlußartig zusammenlagern und dadurch den Fusionsvorgang einleiten. Es entsteht ein stabiler hetero-oligomerer Komplex (SNARE-Komplex), der nach erfolgter Fusion durch die ATPase NSF und den Kofaktor a-SNAP wieder dissoziiert wird. Während die Assoziation von SNAREs sowie die damit verbundenen Intermediate und Konformationsänderungen bereits gut verstanden sind, ist über den Mechanismus der NSF-vermittelten Dissoziation nur wenig bekannt. Man nimmt an, dass NSF den SNARe-Komplex ringartig umfaßt, wobei a-SNAP als Adaptor fungiert. Nachfolgend wir der SNARE-Komplex durch eine durch ATP-Hydrolyse angetriebene Konformationsänderung in NSF dissoziiert. Im hier vorgestellten Projekt ist geplant, die Interaktion von NSF und a-SNAP mit SNARE-Komplexen im Detail zu untersuchen und die Einzelschritte der Dissoziationsreaktion aufzuklären. Im ersten Teil des Vorhabens soll die Bindung von NSF und a-SNAP an den SNARE-Komplex charakterisiert werden. Ziel ist es, ein genaueres Bild über die zugrundeliegenden Protein-Protein-Interaktionen und den Aufbau des Disassemblyapparates zu erhalten. Anschließend soll die NSF-katalysierte Dissoziation von SNARE-Proteinen untersucht werden. Dabei werden proteinchemische, fluoreszenzspektroskopische und kalorimetische Methoden zum Einsatz kommen. Außerdem sollen durch gezielte Verwendung definierter Mutanten sowie von nicht hydrolysierbaren ATP-Analoga vertiefende Einblicke in den Mechanismus der ATPase NSF erhalten werden.