Optimierung von RNAi-Methode zur Durchführung funktioneller Genomik in Erdbeerfrüchten

我是Vorantrag konnte gezeigt，dass das Einschleusen von Doupelsträngier RNA，die korRespondierend zu Spezifischen endgenischen Genequenzen ist，zur Inhibierung der entsprechenden Genuncktion in Erdbeerfrüchen füHRT。[中英文摘要]Herbewurden Konstrukte Mittels Agrobakterien in unreife Früchte Eingecbrht，die umgekehrt t angeordnete Kopien eines Transgenes MIT Einem Intron ALS Spacer hintereem einem Starken Promotor(Intron Hirp RNA Konstrukt，ihpRNA)Transkribieren.用RNA-干扰素特征功能分析von reifekorrelerten Genen Wie的DNA合成酶(FACHS)、花青素合成酶(FAANS)和葡萄糖基转移酶(FaGT1)。病毒基因组中的病毒与病毒的整合和病毒感染病毒(病毒诱导的基因沉默，VIGS)之间的关系。在Weiterführung Dieser arbeiten is das Ziel des vorliegenden Projektes die deffizienz der Methoden zu Optimieren um diese für Hochduchsatz-Verfahren nutzen zu knnnen.因此，我们将从以下几个方面对这些基因进行定义：FOMT(Sequenzabschnitte Der Fachs And Des OmetylTransferasegens)，Diejenigen Teilstücke Idniziert，die für eine erfolgreiche Heraburiziert der pflanzeneigen gene ALS dipelstränGige RNA vorliegen müssen.维特欣和麻省理工学院Bisher unbekannten Funktionen(FaGT3，FaGT4)and zuwenden.在基因、蛋白质和新陈代谢的调控下，这些都是非常重要的。并行的大足将作为VIGS系统的重要组成部分，其功能不同于其他类型的基因，因此，它们将在未来的发展中发挥重要的作用。在Erdbeeren的复制和Ausbreitung des SMYEV的复制和Ausbreitung des SMYEV在Verschiedenen PflanzenOrganen的Sowie zur Akkumulation中进行复制和复制。Gleichzeitig将死于Erdbeeren untersuht的病毒-病毒系统。

Im Vorantrag konnte gezeigt werden, dass das Einschleusen von doppelsträngiger RNA, die korrespondierend zu spezifischen endogenen Gensequenzen ist, zur Inhibierung der entsprechenden Genfunktion in Erdbeerfrüchten führt. Hierbei wurden Konstrukte mittels Agrobakterien in unreife Früchte eingebracht, die umgekehrt angeordnete Kopien eines Transgens mit einem Intron als Spacer hinter einem starken Promotor (intron hairpin RNA Konstrukt, ihpRNA) transkribieren. Diese spezielle Technik der RNA-Interferenz eignet sich zur Funktionsanalyse von reifekorrelierten Genen wie dies beispielhaft an einem Chalkonsynthase (FaCHS)-, Anthocyanidinsynthase (FaANS)- und Glucosyltransferase (FaGT1)-Gen demonstriert wurde. Auch die Integration der Pflanzengensequenz in das virale Genom eines RNA-Virus und die Infektion der Pflanzen mit diesem rekombinanten Virus (virus-induced gene silencing, VIGS) verliefen erfolgreich. In Weiterführung dieser Arbeiten ist das Ziel des vorliegenden Projektes die Effizienz der Methoden zu optimieren um diese für Hochdurchsatz-Verfahren nutzen zu können. So soll durch Verwendung verschiedener definierter Sequenzabschnitte der FaCHS und des OMethyltransferasegens (FaOMT) diejenigen Teilstücke identifiziert werden, die für eine erfolgreiche Herabregulation der pflanzeneigenen Gene als doppelsträngige RNA vorliegen müssen. Weiterhin ist geplant die hierbei erzielten Ergebnisse für die Ausschaltung verschiedener Gene des Flavonoidstoffwechsels (FaANR, FaLAR, FaDFR) und mit bisher unbekannten Funktionen (FaGT3, FaGT4) anzuwenden. Es sollen jeweils die Auswirkungen der Herabregulation auf die mRNA-, Protein- und Metabolitengehalte untersucht werden. Parallel dazu wird das VIGS-System weiter entwickelt da hiermit auch die Funktion derjenigen Gene untersucht werden kann, die in der frühen Reifungsphase exprimiert werden. Die Untersuchungen führen auch zu Erkenntnissen der Replikation und Ausbreitung des SMYEV in Erdbeeren in zeitlicher Hinsicht nach Infektion sowie zur Akkumulation in verschiedenen Pflanzenorganen. Gleichzeitig wird die Eignung des bislang einzigen Virus-Vektorsystems in Erdbeeren untersucht.