SPINDLE POLE BODY PHOSPHOPROTEOME

这个子项目是许多研究子项目中的一个 由NIH/NCRR资助的中心赠款提供的资源。子项目和 研究者（PI）可能从另一个NIH来源获得了主要资金， 因此可以在其他CRISP条目中表示。所列机构为 研究中心，而研究中心不一定是研究者所在的机构。 在2005年7月发表在《细胞生物学杂志》上的一篇论文中，迈克·鲁特的实验室（洛克菲勒）报告了一项惊人的发现， 他们可以使用蛋白A-标记的Mlp 2在IgG-磁珠上分离完整的SPB（Niepel等（2005）J.CellBiol. 170：225-235）。SPB是酵母中心体。 MLP 2基因和相关的MLP 1基因编码丝状蛋白 与脊椎动物Tpr蛋白有关。 Mlp 1和Mlp 2附着在核孔复合物的核表面，但Mlp 2也 通过直接结合到核心组分Spc 110、Spc 42和Spc 29来接触SPB。 我们建议利用能力， 使用标记形式Mlp 2分离SPB，着眼于鉴定SPB组分上的磷酸化位点。 的 研究人员通过从SPB中蛋白质的凝胶中切除条带，鉴定出18种核心SPB组分中的11种 准备. 虽然这项技术显然有效，但它并不是鉴定复合物中所有蛋白质的最佳方法 或用于鉴定磷酸化肽。 我们建议重新审视Mlp 2-SPBs的质谱分析 使用MuDPIT和其他优化用于鉴定磷酸化位点的策略来创建SPB磷酸蛋白质组。

This subproject is one of many research subprojects utilizing the resources provided by a Center grant funded by NIH/NCRR. The subproject and investigator (PI) may have received primary funding from another NIH source, and thus could be represented in other CRISP entries. The institution listed is for the Center, which is not necessarily the institution for the investigator. In a July 2005 paper in the Journal of Cell Biology, Mike Rout's laboratory (Rockefeller) reported the startling finding that they could isolate entire, intact SPBs on IgG-magnetic beads using Protein A-tagged Mlp2 (Niepel et al. (2005) J. Cell Biol. 170:225-235). The SPB is the yeast centrosome. The MLP2 gene and the related MLP1 gene encode filamentous proteins related to the vertebrate Tpr protein. Mlp1 and Mlp2 attach to nuclear face of nuclear pore complexes, but Mlp2 also contacts SPBs via direct binding to the core components Spc110, Spc42 and Spc29. We propose to use the ability to isolate SPBs using a tagged version of Mlp2 with an eye to identifying phosphorylation sites on SPB components. The investigators identified 11 of the 18 core SPB components by excising bands from a gel of the proteins in the SPB preparation. While this technique clearly works, it is not optimal for the identification of all of the proteins in the complex or for the identification of phosphorylated peptides. We propose to revisit the mass spectrometric analysis of Mlp2-SPBs using MuDPIT and other tactics optimized for the identification of phosphorylation sites to create a SPB phoshoproteome.