High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography.
High-Throughput Screening to Obtain Crystal Hits for Protein Crystallography.
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DOI：
10.3791/65211
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发表时间：
2023-03-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Bowman SEJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Budziszewski GR;Snell ME;Wright TR;Lynch ML;Bowman SEJ
X射线晶体学是识别大分子结构最常用的技术，但将蛋白质结晶成适合衍射的有序晶格的关键步骤仍然具有挑战性。生物分子的结晶在很大程度上是实验定义的，这个过程可能是劳动密集型的，对资源有限的机构的研究人员来说是禁止的。在国家高通量结晶（HTX）中心，已经实施了高度可重复的方法来促进晶体生长，包括自动化高通量1，536孔油下微批板设置，旨在对广泛的结晶参数进行采样。在6周的过程中使用最先进的成像模式监测板，以提供对晶体生长的洞察，以及准确区分有价值的晶体命中。此外，用于识别晶体命中的经过训练的人工智能评分算法的实施，加上用于查看实验图像的开源用户友好界面，简化了分析晶体生长图像的过程。在这里，描述了用于制备混合物和结晶板、对板成像以及以确保再现性并增加成功结晶的可能性的方式识别命中的关键程序和仪器。
X-ray crystallography is the most commonly employed technique to discern macromolecular structures, but the crucial step of crystallizing a protein into an ordered lattice amenable to diffraction remains challenging. The crystallization of biomolecules is largely experimentally defined, and this process can be labor-intensive and prohibitive to researchers at resource-limited institutions. At the National High-Throughput Crystallization (HTX) Center, highly reproducible methods have been implemented to facilitate crystal growth, including an automated high-throughput 1,536-well microbatch-under-oil plate setup designed to sample a wide breadth of crystallization parameters. Plates are monitored using state-of-the-art imaging modalities over the course of 6 weeks to provide insight into crystal growth, as well as to accurately distinguish valuable crystal hits. Furthermore, the implementation of a trained artificial intelligence scoring algorithm for identifying crystal hits, coupled with an open-source, user-friendly interface for viewing experimental images, streamlines the process of analyzing crystal growth images. Here, the key procedures and instrumentation are described for the preparation of the cocktails and crystallization plates, imaging the plates, and identifying hits in a way that ensures reproducibility and increases the likelihood of successful crystallization.
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影响因子：
7.4
作者：
Fleming, Aaron M.;Tran, Renee;Omaga, Carla A.;Manage, Shereen A. Howpay;Burrows, Cynthia J.;Conboy, John C.
通讯作者：
Conboy, John C.
影响因子：
3.7
作者：
Bruno AE;Charbonneau P;Newman J;Snell EH;So DR;Vanhoucke V;Watkins CJ;Williams S;Wilson J
通讯作者：
Wilson J
DOI：
10.1107/s2059798323001274
发表时间：
2023-03-01
期刊：
Acta crystallographica. Section D, Structural biology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
3
作者：
Luft, JR;Collins, RJ;DeTitta, GT
通讯作者：
DeTitta, GT
DOI：
10.1107/s0907444999002085
发表时间：
1999-05-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
Luft, JR;DeTitta, GT
通讯作者：
DeTitta, GT