Strukturbestimmung von Proteorhodopsin mittels NMR Spektroskopie

使用核磁共振波谱法测定蛋白视紫红质的结构

• 批准号: 177627320
• 负责人: Professor Dr. Volker Dötsch
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biophysikalische Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2009-12-31 至 2011-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/177627320?language=en
• 关键词: Strukturbestimmung; von; Proteorhodopsin; mittels; NMR

Membranproteine stellen derzeit eine der großen Herausforderungen der Strukturbiologie dar. Ihre Strukturbestimmung wird zum einen dadurch erschwert, dass viele Membranproteine sich nur sehr schlecht in zellulären Systemen exprimieren lassen und zum anderen dadurch, dass sowohl diffraktierende Kristalle als auch gut aufgelöste NMR Spektren nur schwer zu erhalten sind. In den letzten Jahren haben wir gezeigt, dass wenigstens das Expressionsproblem durch die Verwendung eines zellfreien Expressionssystems in sehr vielen Fällen gelöst werden kann. Basierend auf diesem zellfreien Expressionssystem haben wir Methoden entwickelt, mit denen NMR-aktive Isotope in bestimmten Mustern eingeführt werden können, die die Resonanzzuordung in NMR Experimenten erheblich erleichtern. Dadurch ist es uns möglich, auch größere Membranproteine strukturell zu untersuchen. In dem vorliegenden Antrag beschreiben wir die geplante Strukturuntersuchung von Proteorhodopsin mittels Flüssig-NMR Spektroskopie. NMR-Spektren des Proteorhodopsin zeigen eine hervorragende Dispersion der chemischen Verschiebungen. Um Informationen über die Seitenketten zu erhalten, werden wir das Protein mit SAIL Aminosäuren markieren, die es erlauben, auch große Proteine mittels NMR zu untersuchen. Diese Strukturuntersuchungen werden die Basis für eine detaillierte Untersuchung der Konformationen angeregter Zustände liefern.

膜蛋白质是结构生物学中的一个重要组成部分。Ihre Strukturbestimmung wird zum einen dadurch erschwert，dass viele MembranProteine sich努尔sehr schlecht in zellulären Systemen exprimeren lassen und zum anderen dadurch，dass sowohl diffraktierende Kristalle als auch gelöste NMR Spektren努尔schwer zu erhalten sind.在过去的几年里，我们已经认识到，表达问题是通过在韦尔登地区使用一个自由表达系统来解决的。在此基础上，我们对核磁共振反应的方法进行了改进，使核磁共振反应的活性同位素在实验中得到了韦尔登，从而使核磁共振实验中的共振现象得到了明显的改善。数据分析师是我们的möglich，也größere膜蛋白strukturell zu untersuchen。在这些预处理的Antrag中，我们使用Flüssig-NMR Spektroskopie检测视紫红质的结构。用核磁共振谱法测定化学分散液中的视紫红质含量。在信息方面，韦尔登将使用SAIL氨基标记蛋白质，并使用核磁共振技术检测蛋白质。Diese Strukturuntersuchungen韦尔登die Basis für eine detaillierte Untersuchung der Konformationen angeregter Zustände liefern.

项目成果

Characterization of the ground state dynamics of proteorhodopsin by NMR and optical spectroscopies

通过核磁共振和光谱表征变形视紫红质的基态动力学

• DOI: 10.1007/s10858-012-9684-8
• 发表时间: 2012
• 期刊: Journal of Biomolecular NMR
• 影响因子: 2.7
• 作者: Stehle;F. Scholz;F. Löhr;S. Reckel;C. Roos;M. Blum;M. Braun;C. Glaubitz;V. Dötsch;J. Wachtveitl;H. Schwalbe
• 通讯作者: H. Schwalbe