Massenspektrometrische Identifizierung und Charakterisierung neuer Moleküle unter spezifischer Stimulation der Membranrezeptoren der "Toll-like" Familie

“Toll-like”家族膜受体特异性刺激下新分子的质谱鉴定和表征

• 批准号: 18242561
• 负责人: Professor Dr. Parviz Ahmad-Nejad
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Mikrobiologie und Laboratoriumsmedizin
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/18242561?language=en
• 关键词: Massenspektrometrische; Identifizierung; und; Charakterisierung; neuer

Die Membranrezeptoren der Toll-like -Familie spielen eine zentrale Rolle in der Aktivierung des angeborenen Immunsystems 1-4. Die Familie der TLRs umfasst bis heute 10 Mitglieder (TLR 1-10) 5 und sie erkennen spezifisch strukturell konservierte mikrobielle Bestandteile wie z.B. Lipopolysaccharide gram-negativer Bakterien (LPS) 6 oder unmethylierte bakterielle DNA (CpG-DNA) 7. Ihr Engagement führt in Zellen des innaten Immunsystems zur Produktion und Sekretion von pro-inflammatorischen Zytokinen wie IL-6, IL-12 und TNF¿. Die Induktion dieser inflammatorischen Antworten verläuft über die Aktivierung eines evolutionär konservierten Signaltransduktionsweges, welcher die Moleküle MyD88 und TRAF6 einschließt und Parallelen zum IL-1 induziertem Signaltransduktionsweg zeigt 8-12. Die bisherige Datenlage zeigt, dass die Signaltransduktionswege `downstream´ von MyD88 für verschiedene Stimuli nicht absolut kongruent sind. Die Mechanismen der Rezeptoraktivierung selbst, wie auch weitere, offensichtlich notwendige Moleküle dieses Signalweges sind bislang nicht oder nur teilweise definiert. Ein Experimentalsystem, welches weitere entscheidende Moleküle in dieser Kaskade aufzudecken vermag, liegt in der Verwendung eines GFP-MyD88 Fusionsproteins, welches in murinen Makrophagen stabil gebildet wird und bereits erfolgreich publiziert wurde. Da dieses Fusionsprotein über spezifische Antikörper präzipitiert werden kann, bietet es die Möglichkeit der biochemischen Aufreinigung und folgenden molekularen Definition des aktivierten Signalkomplexes durch massenspektrometrische Analysen (MALDI-TOF). Die generierten Daten sollen durch vergleichende Proteom Profilinguntersuchungen (Phosphoprotein- und Gesamtprotein- Profiling) komplementiert werden.

Toll样家族的膜受体在免疫系统激活中起着中心作用1-4。TLR家族于10日晚些时候（TLR 1-10）5和他们的特殊结构与Z.B.脂多糖革兰氏阴性菌Bakterien（LPS）6或非甲基化Bakterielle DNA（CpG-DNA）7。Ihr Engagement führt in Zellen des innaten Immunsystems zur Produktion und Sekretion von pro-inflammatorischen Zytokinen wie IL-6，IL-12 und TNF？Die Induktion dieser inflammatorischen Antworten verläuft über die Aktivierung eines evolutionär konservierten Signaltransduktionsweges，welcher die Moleküle MyD88 und TRAF6 einschließt und scholelen zum IL-1 induziertem Signaltransduktionsweg 8-12.在MyD 88的下游信号传输对异常刺激的影响并不绝对。Die Mechanismen der Rezeptoraktivierung selbst，wie auch weitere，offensichtlich notwendige Moleküle diesSignalweges sind bislang nicht or努尔teilweise definiert.在一个实验系统中，我们还可以在实验室中建立分子模型，通过GFP-MyD 88融合蛋白的表达，在小鼠体内建立稳定的生物学模型，并获得更好的结果。这种特异性的融合蛋白可用于韦尔登的制备，它是通过质谱分析（MALDI-TOF）确定活性信号复合物的生物化学自由基和分子量的分子量。一般数据通过蛋白质谱分析（磷蛋白和类蛋白质谱分析）完成韦尔登。