GYF-Domänen-vermittelte Protein-Wechselwirkungen

GYF 结构域介导的蛋白质相互作用

• 批准号: 20026493
• 负责人: Professor Dr. Christian Freund
• 金额: --
• 依托单位: Arbeitsgruppe Freund - Protein Biochemistry
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/20026493?language=en
• 关键词: GYF; Dom; nen; vermittelte; Protein

GYF-Domänen klassifizieren eine in Eukaryonten vorkommende Familie von Protein- Interaktionsdomänen, die Prolm-reiche Sequenzen (PRS) erkennen. Das konservierte Tripeptid Glycin-Tyrosin-Phenylalanin (GYF) ist dabei Teil eines konservierten Strukturmotifs, das insbesondere unter Einbindung vieler aromatischer Aminosäuren zur Bindung des Liganden beiträgt. Die erste GYF-Domäne wurde in dem Protein CD2BP2 identifiziert und vermittelt die Bindung an CD2. Entsprechend wurde CD2 in den Kontext der CD2-abhängigen T-Zell- Signaltransduktion gestellt. Wir haben in den letzten Jahren die erste Struktur eines GYFDomänen- Ligandenkompl exes mittels NMR-Spektroskopie gelöst und für repräsentative GYFDomänen aus Hefe, der Acker-Schmalwand (A. thaliana) und Mensch eine umfassende Analyse der Mechanismen zur Erkennung von Prolin-reichen Sequenzen durchgeführt. Dabei konnten wir mit Hilfe des Phage Display und mittels der Hefe-Zwei-Hybrid-Analyse wahrscheinliche zelluläre Interaktionspartner einiger GYF-Domänen-enthaltender Proteine verifizieren. Dieser Antrag hat nun zum Ziel, die neu gefundenen Interaktionen von GYF-Domänen zu charakterisieren und den möglichen funktionellen Zusammenhang, in dem GYF-Domänen eine Rolle spielen, weitergehend zu untersuchen. Insbesondere wollen wir die relative Bedeutung des CD2BP2-GYF-Proteins in der T-Zell-Signaltransduktion und in spliceosomalen Komplexen aufklären. Die Funktion des CD2BP2 in T-Zellen soll durch siRNA-Experimente in Kombination mit der Messung von Interleukin-2-Produktion und Phosphorylierungsmustern untersucht werden. Weitergehende Experimente werde wir dabei mit primären T-Zellen CD2- transgener Mäuse durchführen. Die vermutete Einbindung von GYF- und WW-Domänenenthaltenden Proteinen in spliceosomale Komplexe soll durch konfokale Mikroskopie und FRET-Analyse von CFP/YFP-Fusionen mit den entsprechenden GYFAVW-Proteinen und deren Bindungspartnern erforscht werden, Komplementär werden wir die Wechselwirkung der beteiligten Protein-Domänen NMR-spektroskopisch und biophysikattsch untersuchen, um die mikroskopischen Experimente durch mechanistische Modelle zu ergänzen und um herauszufinden, ob die Interaktionspartner unabhängig, kompetitiv oder kooperativ binden. Da wir für die GYF-Domäne des Hefe-SMY2-Proteins zum einen das Splicing-Protein MSL5 und zum anderen den Translationsfaktor EAP1 als Interaktionspartner gefunden haben, wollen wir in diesem Fall einen möglichen Zusammenhang dieser beiden Prozesse aufklären. Strukturell soll hier geklärt werden, inwieweit die S M Y2-GYF-Domäne, die im Vergleich zur CD2BP2-GYFDomäne eine veränderte C-terminale Domänengrenze aufweist, einen unterschiedlichen Faltungsmodus besitzt. Die NMR-Struktur der SMY2-GYF-Domäne im Komplex mit einem natürlichen Liganden soll gelöst, um die festgestellten Bindungseigenschaften auf struktureller Ebene zu verstehen. Da nach neueren Erkenntnissen dieser C-terminale, nicht-konservierte Teil der GYF-Domänen PRS-unabhängige Protein-Bindungseigenschaften besitzt, kann die Struktur als Ausgangspunkt für die Charakterisierung neuer GYF-Domänen-Bindungspartner dienen.

GYF-Domänen在Eukaryonten vorkommende Familie von Protein- Interaktionsdomänen中分类一个家族，通过Prolm-reiche Sequenzen（PRS）进行。三肽甘氨酸-酪氨酸-苯丙氨酸（GYF）是一种结构相似的蛋白质，它可以与多种芳香性氨基酸结合，从而与配体结合。第一个GYF-域是在蛋白质CD 2BP 2中鉴定并检测与CD 2的结合。在CD 2-Abhängigen T-Zell- Signaltransduktion gestellt的上下文中插入CD 2。我们已经在近几年的GYFDomänen- Ligandenkompl exmittels NMR Spektroskopie gelöst和für repräsentative GYFDomänen aus Hefe，der Acker-Schmalwand（A. thaliana）and Mensch eine umfassessment Analysis der Mechanismen zur Erkennung von Prolin-reichen Sequenzen durchgeführt.我们将利用噬菌体展示技术和Hefe-Zwei-Hybrid-Analyse技术，通过与GYF-Domänen-Proteine的相互验证，来实现对细胞的分析。这位Antrag先生在Ziel，GYF-Domänen的新成员之间的互动具有特点，并在GYF-Domänen的一个角色中发挥更大的作用。我们将探讨CD 2BP 2-GYF蛋白在T-Zell信号转导和剪接复合体中的相关作用。通过siRNA联合检测白细胞介素-2-产生和磷酸化，研究了CD 2BP 2在T细胞中的作用。接下来的实验我们将使用原始的T-Zellen CD 2- transgener Mäuse进行。通过对CFP/YFP-融合体的显微镜和FRET-分析，确定GYF-和WW-Domänen蛋白在剪接复合体中的结合，并与GYFAVW-Proteinen结合，进行蛋白质-Domänen的核磁共振谱和生物物理学研究，通过建立机理模型和实验研究，无论是国际合作伙伴还是竞争者还是合作者。为了使Hefe-SMY 2-Proteins的GYF结构域成为一个剪接蛋白MSL 5和翻译因子EAP 1，我们将在今年秋天进行一次更深入的研究。Strukturell解决了韦尔登问题，在S M Y2-GYF-Domäne中，在CD 2BP 2-GYF Domäne中使用一个veränderte C-末端Domänengrenze aufweist，一个未编译的Faltungsmodus besitzt。SMY 2-GYF-Domäne的NMR-结构在复合材料中带有一个天然配体，该配体可以通过结构化的Ebene zu verstehen进行固定。在C-末端的新结构中，GYF-Domänen PRS-unabhängige Protein-Bindungseigenschaften besitzt的不一致性，可以将结构调整为GYF-Domänen-Bindungspartner的新特性。