Identification and characterization of cell membrane receptors of binary actin-ADP-ribosylating toxins

二元肌动蛋白-ADP-核糖基化毒素细胞膜受体的鉴定和表征

• 批准号: 214838098
• 负责人: Professor Dr. Klaus Aktories
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Experimentelle und Klinische Pharmakologie,Toxikologie und Naturheilkunde
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2011-12-31 至 2015-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/214838098?language=en
• 关键词: Identification; characterization; cell; membrane; receptors

Clostridium difficile ist die Ursache der Pseudomembranösen Kolitis und der Antibiotika-assoziierten Diarrhoe. Die C. difficile ADP-Ribosyltransferase CDT wird häufig in hypervirulenten C. difficile- Stämmen gefunden. Das Toxin gehört zur Familie der binären Aktin-ADP-ribosylierenden Toxine wie C. perfringens Iota-Toxin, C. spiroforme-Toxin und C. botulinum C2-Toxin. In dem vorliegenden Projekt soll der Rezeptor für CDT identifiziert und charakterisiert werden. Die Rezeptor-Identifizierung erfolgt mit haploiden reprogrammierten CDT-sensitiven Hap1-Zellen, die sich nach Toxinbehandlung von der Unterlage ablösen. Nach Insertionsmutagenese mit retroviralen DNA-Elementen und einer umfassenden Parallel-Sequenzierung (deep sequencing) des Genoms von CDT-resistenten Hap1- Zellen konnte der lipolysis-stimulated lipoprotein receptor (LSR) als ein möglicher Rezeptor für CDT und andere Aktin-ADP-ribosylierende Toxine identifiziert werden. LSR ist ein Lipoproteinrezeptor und ein tight-junction-Regulator. Die Interaktion von LSR mit CDT soll charakterisiert und die Rolle des Rezeptors bei der Aufnahme und bei den zytotoxischen Wirkungen von CDT untersucht werden. Andererseits wird der Einfluss von CDT auf die Funktion von LSR analysiert. Identifizierung des Toxinrezeptors und Charakterisierung der Toxinaufnahme sind grundlegend für das Verständnis der Wirkung und pathogenetischen Rolle von CDT und der verwandten Toxine und werden für die Entwicklung von Antitoxinstrategien entscheidend sein.

艰难梭菌是伪膜性结肠炎和抗生素相关性腹泻的病原菌。迪伊C difficile ADP-核糖基转移酶CDT在高脂血症C.艰难的- Stämmen gefunden。该毒素与C.产气荚膜梭菌（C. spiroforme-Toxin und C.肉毒杆菌C2毒素。In dem vorliegenden Projekt soll der Rezeptor für CDT identifiziert und charakterisiert韦尔登.通过对CDT敏感的Hap 1-Zellen进行单倍性重编程，对受体进行了鉴定，从而获得了用于体外培养的毒素。利用逆转录病毒DNA元件和深度测序技术，将CDT耐药Hap 1- Zellen基因组插入到脂解刺激脂蛋白受体（LSR）中，可作为CDT和Aktin-ADP-ribosylerende毒素鉴定的一种更好的受体韦尔登（Aktin-ADP-ribosylerende Toxine）。LSR是一种脂蛋白受体和一种紧密连接调节剂。LSR与CDT的相互作用具有很好的特性，反应器在培养过程中的作用和CDT的毒性作用也很明显。CDT对LSR分析功能的影响也很大。毒素受体的鉴定和毒素的特性是了解CDT的致病机理和毒性的基础，也是制定抗毒素策略的韦尔登。