Charakterisierung des ADP-ribosylierenden Bacillus sphaericus Toxins MTX

球形芽孢杆菌产朊毒素（adp -核苷酸毒素，MTX）。《毒素清单》（Das Toxin ist von besderem），药理学和毒理学研究，以及在Insekten-也包括Säugetierzellen zytotoxische和zytopathische特征schaften。Das毒素是一种蛋白质水解活性物质，它包含在n端~ 27kda和c端~ 70kda片段中。Das 27kda片段besitzt ADP-Ribosyltransferase-Aktivität和修饰的体外zahlreicprotein in Zytosol von Insekten和Säugetierzellen。Das 70kda Fragment list wahrscheinlich fgr die Zellbindung and die Aufnahme des Toxins in die zellverantworlich。在dem vorliegenden Antrag soll die Enzymaktivität des Toxins的生物化学特性和die真核分子Zielsubstrate der细菌adp -核糖基转移酶鉴定。本研究对肉毒杆菌C2毒素的adp -核糖基转移酶和Zelltransportsystem进行了研究。zelltransportsystemssollen die zytotoxischen und zellulären Wirkungen von MTX in verschiedenen Zelltypen (Insektenzellen und Säugetierzellen) untersucht werden。schließ ßlich soll die Interaktion der 27 kDA Enzymdomäne des B. sphaericus Toxins mit der推定70 kDA binding - und Transportdomäne， die zu einer inhibition der Enzymaktivität fhrt, charterisieret werden。

Bacillus sphaericus produziert ein 97 kDA ADP-ribosylierendes Toxin (MTX), das moskitozidale Eigenschaften hat. Das Toxin ist von besonderem pharmakologischem und toxikologischem Interesse, weil es sowohl in Insekten- als auch in Säugetierzellen zytotoxische und zytopathische Eigenschaften hat. Das Toxin wird proteolytisch aktiviert, wobei ein N-terminales ~27 kDA und ein C-terminales ~70 kDA Fragment entstehen. Das 27 kDa Fragment besitzt ADP-Ribosyltransferase-Aktivität und modifiziert in vitro zahlreiche Proteine im Zytosol von Insekten- und Säugetierzellen. Das 70 kDA Fragment ist wahrscheinlich für die Zellbindung und die Aufnahme des Toxins in die Zelle verantwortlich. In dem vorliegenden Antrag soll die Enzymaktivität des Toxins biochemisch charakterisiert und die eukaryonten Zielsubstrate der bakteriellen ADP-Ribosyltransferase identifiziert werden. Es wird ein Fusionstoxin konstruiert, das aus der katalytischen Domäne der ADP-Ribosyltransferase von B. sphaericus und dem Zelltransportsystem von Clostridium botulinum C2 Toxin besteht. Mit Hilfe des Zelltransportsystems sollen die zytotoxischen und zellulären Wirkungen von MTX in verschiedenen Zelltypen (Insektenzellen und Säugetierzellen) untersucht werden. Schließlich soll die Interaktion der 27 kDA Enzymdomäne des B. sphaericus Toxins mit der putativen 70 kDa Bindungs- und Transportdomäne, die zu einer Inhibiton der Enzymaktivität führt, charakterisiert werden.