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miRNA制御核酸の機能を細胞単位で解析する技術の開発

开发逐个细胞分析 miRNA 调节核酸功能的技术

基本信息

批准号：
21K05123
负责人：
平野悠
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05123/
关键词：
microRNA 細胞アンチセンス顕微鏡 ncRNA

项目摘要

microRNA(miRNA)は22塩基前後の短鎖ノンコーディングRNAであり、細胞内でmRNAと相互作用することで、細胞増殖などの基本的な生命現象を調整している。一部のmiRNAはがんなどの疾病を誘起することが知られていることから、miRNAに相補的なアンチmiRNAオリゴ核酸(anti-microRNA oligonucleotides, AMO)は医薬品としても期待されている。１本鎖のAMOは、細胞内にリポフェクションで導入されると核に蓄積する傾向があることから、細胞質で機能するmiRNAへの結合はわずかであると考えられる。一方、我々は、安定な２本鎖構造を有するAMOを開発し、高い活性を持つことを確認しているが、細胞内の安定性や局在を評価する手法がないことが課題になっていた。そこで、本研究ではAMOの細胞内の局在と活性の相関を評価することを目指している。今年度は、安定化2本鎖構造を含む、AMOに様々な化学修飾および、蛍光標識を導入し、細胞内での安定性や局在等の評価を進めた。具体的には、1本鎖のアンチセンス核酸の一方の末端に2本鎖構造、もう一方の末端に化学修飾等を導入して、細胞内動態を観察し、miRNA抑制活性との相関を評価した。その結果、安定化した2本鎖を5’末端に導入した場合、および3’末端に導入し、5’末端を化学修飾したAMOでは、細胞内での分解および核への移動が抑制され、高いmiRNA抑制活性を示すことが明らかとなった。

microRNA (miRNA)は22塩婩组のノンコーディングRNAであり, microRNA The interaction between intracellular mRNA and cell proliferation and the regulation of basic life phenomena are regulated. Part of the disease-causing disease-causing microRNA and anti-miRNA nucleic acid (anti-microRNA) that complement each other oligonucleotides, AMO) is a medical product that we are looking forward to. 1. The AMO of the lock, the tendency of intracellular accumulation of AMO and the introduction of intracellular nuclei.あることから, cytoplasmic でfunction するmiRNAへのcombination はわずかであると考えられる. One side, I am the same, and the stability of the lock structure is the same as the AMO opening, high activity, and high accuracy Identification and stability of the cells, the evaluation of the stability of the cells, and the technique of the method are the subject of research.そこで、This study is based on the evaluation of the intracellular localization and activity of AMO. This year, the evaluation of the stability of the 2 main lock structures, the chemical modification of AMO, the introduction of the light mark, and the stability of the intracellular stability were carried out. Specific locks, 1 Honlock, one side of the end of nucleic acid, 2 Benlock structure, one side of the end of nucleic acid The introduction of chemical modifications, etc., the observation of intracellular dynamics, and the correlation of miRNA inhibitory activity are evaluated. Result of stabilization, 2 main locks, 5' end introduction, etc., 3' end introduction, 5' end chemical modification, A MO では, intracellular decomposition およびnuclear へのmovement がinhibition され, high いmiRNA inhibitory activity をshow すことが明らかとなった.