T型／H型ペプチド構造を持つコバレントバインダーによる標的蛋白質の不可逆的阻害

前年度に確立したペプチド型コバレントバインダーの直接的な取得法を、本研究課題にて提案したTペプチド型コバレントバインダーの取得へと適用することを試みた。具体的には、標的蛋白質に結合するペプチド型コバレントバインダーを一次fragmentとみなし、fragment伸長法の概念で更に性能のよい結合体を取得すべく、T7ファージ上に提示されているランダムペプチドライブラリーに共有結合させることでT型構造を持つ二次ライブラリーを作製することを試みた。しかしながら、fragmentとランダムペプチドライブラリーを提示しているファージとの分離精製を行う際などに、幾つかの予期しない困難が生じ、改善が見られなかったため、中分子コバレントバインダーの更なるモダリティー拡張として、T型ペプチド構造ではなくDNAアプタマー構造を使用することを優先して研究を進めることとした。具体的には、前年度に基礎検討を行ったSuFEx反応型warheadをDNAアプタマーに導入したのち、前年度にペプチド構造で行った際と同様の手法で、標的結合に伴う加水分解耐性が向上していることを確認し、結果を原著論文として発表した。現在はこの結果をもとに、進化分子工学的手法にて、DNAアプタマー型コバレントバインダーの直接的な取得を試みている。なお、fragment伸長法を用いて、性能のよい非共有結合型のバインダーを簡易/迅速取得するための蛍光追跡技術を新たに開発し、本研究の派生研究としてまとめあげ、原著論文として発表した。

前年度に確立したペプチド型コバレントバインダーの直接的な取得法を、本研究課題にて提案したTペプチド型コバレントバインダーの取得へと適用することを試みた。具体的には、標的蛋白質に結合するペプチド型コバレントバインダーを一次fragmentとみなし、fragment伸長法の概念で更に性能のよい結合体を取得すべく、T7ファージ上に提示されているランダムペプチドライブラリーに共有結合させることでT型構造を持つ二次ライブラリーを作製することを試みた。しかしながら、fragmentとランダムペプチドライブラリーを提示しているファージとの分離精製を行う際などに、幾つかの予期しない困難が生じ、改善が見られなかったため、中分子コバレントバインダーの更なるモダリティー拡張として、T型ペプチド構造ではなくDNAアプタマー構造を使用することを優先して研究を進めることとした。具体的には、前年度に基礎検討を行ったSuFEx反応型warheadをDNAアプタマーに導入したのち、前年度にペプチド構造で行った際と同様の手法で、標的結合に伴う加水分解耐性が向上していることを確認し、結果を原著論文として発表した。現在はこの結果をもとに、進化分子工学的手法にて、DNAアプタマー型コバレントバインダーの直接的な取得を試みている。なお、fragment伸長法を用いて、性能のよい非共有結合型のバインダーを簡易/迅速取得するための蛍光追跡技術を新たに開発し、本研究の派生研究としてまとめあげ、原著論文として発表した。