カンピロバクターの新たな運動性評価法の開発と運動阻害物質のスクリーニング

点击翻译按钮获取中文摘要

カンピロバクター(C. jejuni)は、極めて高い運動性を有し、表面から食品内部へ移動することから、食中毒の防止にはC. jejuniの運動性を阻害することが有効である。2021年度では、従来の2次元での細菌の運動性評価ではなく、濾紙を利用し食品中への移動を想定した細孔中での3次元条件下でのカンピロバクターの運動性＋バイオフィルム(BF)形成能の評価方法の確立ができた。2022年度においては本法を利用し、C. jejuniの運動性の阻害に有効な天然抗菌物質等のスクリーニングを行った。天然抗菌物質としてタイムチモール、オレガノワイルド等を使用した。比較対照として、70%エタノール及び次亜塩素酸Na(200ppm)を使用した。C. jejuni ATCC 29428をCCDA培地に塗布し培養した。形成したコロニーの上に0.45 μmのニトロセルロース製ろ紙をのせた。シャーレの蓋に調製した抗菌物質溶液を染み込ませたペーパーディスクをのせ、蓋をした。CCDA培地にパラフィルムを巻くものと巻かないものを分けて作り、培養(微好気性条件, 37 ℃, 48 h)した。培養後、CCDA培地のろ紙上のコロニーを観察した。なお、1枚のペーパーディスクに対し100 μLの抗菌物質溶液を染み込ませ、1 ~ 3 枚蓋に置いた場合を検討した。また、アルコール及び次亜塩素酸ナトリウムは300μLをシャーレ上のコロニーに吹きかけ、その後にろ紙を置いた。結果として、オレガノワイルド、タイムチモール、ユーカリ油、カルバクロールは揮発してC. jejuniの運動性を阻止した。一方、消毒剤として使用されているアルコール及び次亜塩素酸NaはC. jejuniを阻止できず、ろ紙上にコロニー形成が確認された。以上の結果より、本評価方法によりC. jejuniの運動性阻害物質のスクリーニングが可能であった。