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新規カニクイザル発生工学技術を用いた栄養膜特異的ノックアウト法の開発

利用新型食蟹猴发育工程技术开发滋养层特异性敲除方法

基本信息

批准号：
21K05988
负责人：
岡村永一
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度はまず、昨年度に作製したCRISPR/Cas9条件付きノックアウトベクターの機能を、培養細胞とマウス個体において検証した。まずは培養細胞においてノックアウトの誘導精度とノックアウト効率を検証した。その結果、"漏れ"によるノックアウトはほとんど生じないことが判明した。また、ベクターを保持する細胞においては誘導依存的に少なくとも90%以上という高い効率でノックアウトを実行可能であることが確認できた。実際に、機能未知な6つの遺伝子座を標的としてノックアウト実験を実施し、1つの遺伝子が細胞増殖に寄与する可能性を見出すことに成功した。続いて、CRISPR/Cas9条件付きノックアウトベクターを保持するトランスジェニックマウスを作製した。出生後個体の全身臓器の解析を実施した結果、ノックアウト非誘導下においてもノックアウトが生じている個体が存在した。従って、マウス個体に適用するためにはより"漏れ"の少ない改良型のベクターを用いることが重要であると考えられ、現在作成を進めている。次に、我々が至適化した条件を用いて作出したトランスジェニックマウスの品質を検証した。まず、トランスジーンのコピー数をデジタルPCRを用いて解析した。また、細胞間のモザイク性を検証するため、シングルセルレベルでの解析を実施した。その結果、トランスジーンはほぼ全ての細胞で安定に発現することが確かめられ、ファウンダー世代で表現型解析を十分に実施可能であることが示された。

In the current year and in the last year, the CRISPR/Cas9 conditions will be paid in the first half of the year. In order to improve the accuracy and accuracy of the system, the rate of accuracy is much higher. The result of the test, the error, the result, the result. You may need to make sure that the number of people you depend on is higher than 90%, and the rate is high. The international market and the machine capacity are unknown. The information system of the 6-year-old sub-constellation system is applied, and the possibility of cell colonization of 1-year-old child is successful. The condition of the CRISPR/Cas9 is to pay for each other and to keep it safe. After birth, a full-body device is used to analyze the results of the test, and there is a problem with the birth of the child after birth. There is a lot of information about how to use the improved model to improve the performance of the system, and it is now in the process of being completed. For the second time, we will change the conditions and use the information to make a decision. Please use the parsing tool to analyze the PCR. In vitro, in the cell, in the cell and in the cell. The results, the results, the results and the results.