癌の浸潤・転移に関与するヘパラナーゼ及び血管新生調節因子アンジオモジュリンの研究

乙酰肝素酶和血管生成调节蛋白血管调节蛋白参与肿瘤侵袭转移的研究

• 批准号: 13771416
• 负责人: 山田 修平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771416/
• 关键词: アンジオモジュリン; グリコサミノグリカン; 癌転移; 血管新生; ヘパラナーゼ; ヘパラン硫酸; ヘパリン; 硫酸化オリゴ糖

癌細胞が組織へ浸潤、転移していく際には、癌細胞の分泌するヘパラナーゼによって基底膜のヘパラン硫酸(HS)が分解される過程が含まれる。ヘパラナーゼがHS鎖中のβ-D-グルクロニド結合を特異的に分解することは分かっていたが、詳細な基質特異性はまだ明らかになっていない。そこで、ヒトヘパラナーゼの基質特異性を調べた。発現ベクターにヒトヘパラナーゼcDNAを組み込み、リポフェクション法によりヒトメラノーマ細胞A375Mに導入し、発現させたヘパラナーゼをアフィニティークロマトグラフィーで精製した。精製ヒトヘパラナーゼを、ヘパリン(Hep)及びHSから調製した様々な構造の硫酸化オリゴ糖約20種類に作用させ、消化物をポリアミンカラムを用いたHPLCで分析を行った。構造の違いによる感受性の違いを、消化率によって定量化し、作用のために必須の構造、また作用しやすい構造、作用しにくい構造を推定した。その結果、グルクロニド結合の周辺が高硫酸化されたオリゴ糖ほど、より分解を受けやすいことがわかった。また、分解部位近傍にグルコサミン3硫酸構造が存在すると、分解を受けにくくなることがわかった。一方、アンジオモジュリン(AGM)は腫瘍組織の血管基底膜に特異的に存在する細胞接着タンパク質で、癌性血管の新生を調節する活性を持つことが知られている。これまでに、HSとの相互作用がAGMの搬能発現に重要であることが証明されている。今年度、AGM中のHep/HS結合部位のアミノ酸配列を含むペプチドを化学合成し、アフィニティーカラムを作成した。様々な組織に由来するHep/HSを、高親和性画分と低高親和性画分に分画し、両画分の構成二糖組成を比較した。その結果、ある特定の硫酸基だけが親和力に特に貢献しているわけではなく、AGMとの相互作用にはHS上のある特別な硫酸化配列が重要である可能性が示唆された。

Cancer cells are involved in the process of tissue invasion, migration, secretion, and decomposition of sulfuric acid (HS) in the basement membrane. The β-D-chain in the HS lock binds to a specific molecule, and the specific molecule in the HS lock binds to a specific molecule. The matrix specificity of the matrix was modulated. Discovery of the DNA sequence from the A375M cell. Discovery of the DNA sequence from the A375M cell. Purified by Hep and HS, the sulfated sugars of the structure are analyzed by HPLC. The structure of the structure is affected by the sensitivity of the structure, the digestibility of the structure, the quantification of the structure, the role of the structure, the role of the structure, the estimation of the structure. As a result, the chemical composition of the compound is highly sulfated and decomposed. The structure of sulfuric acid exists near the decomposition site. One method, AGM (AGM), is to detect the presence of specific cells in the basement membrane of tumor tissue, and to detect the activity of cell adhesion and regulation of neovascularization. The interaction between HS and AGM is very important for AGM's energy transfer. This year, AGM Hep/HS binding site of the acid sequence, including chemical synthesis, preparation of the acid sequence. Comparison of Hep/HS, High Affinity and Low Affinity The results show that specific sulfated groups contribute to the affinity of AGM and the interaction of HS with specific sulfated groups.

项目成果

木下 亜希子: "Isolation and structural determination of novel sulfated hexasaccharides from squid cartilage chondroitin sulfate E that exhibits neuroregulatory activities"Biochemistry. 40(42). 12654-12665 (2001)

Akiko Kinoshita：“从鱿鱼软骨硫酸软骨素 E 中分离和测定具有神经调节活性的新型硫酸化六糖”生物化学 40（42）（2001）。

土田 和徳: "Appican, the proteoglycan form of the amyloid precursor protein, contains the chondroitin sulfate Emotif in the repeating disaccharide region and a 4-O-sulfated galactose residue in the linkage region"J. Biol. Chem.. 276(40). 37155-37160 (2001)

Kazunori Tsuchida：“Appican，淀粉样前体蛋白的蛋白聚糖形式，在重复二糖区域包含硫酸软骨素基序，在连接区域包含 4-O-硫酸化半乳糖残基”J. Biol. 276(40)。 .37155-37160 (2001)

坂口 裕美: "Isolation of oligo saccharides from the chondroitin/dermatan sulfate-protein linkage region as reducing sugar chains and preparation of the analytical probes by fluorescent labeling with 2-aminobenzamide"J. Biochem.. 129(19). 107-118 (2001)

Hiromi Sakaguchi：“从软骨素/硫酸皮肤素-蛋白质连接区域分离寡糖作为还原糖链并通过 2-氨基苯甲酰胺荧光标记制备分析探针”J. 129(19)。 2001）

上野 百世: "Structural Characterization of Heparan Sulfate and Chondroitin Sulfate of Syndecan-1 Purified from Normal Murine Mammary Gland Epithelial Cells. Common Phosphorylation of Xylose and Differential Sulfation of Galactose in the Protein Linkage Region

Momoyo Ueno：“从正常鼠乳腺上皮细胞中纯化的 Syndecan-1 的硫酸乙酰肝素和硫酸软骨素的结构表征。蛋白质连接区域中木糖的常见磷酸化和半乳糖的差异硫酸化