発生や分化に伴うヘパラン硫酸の微細構造と増殖・分化因子との結合能の変動と相関

硫酸乙酰肝素在发育和分化过程中精细结构及其与生长和分化因子结合能力的变化及相关性

• 批准号: 11771474
• 负责人: 山田 修平
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771474/
• 关键词: ヘパラン硫酸; 発生; プロテオグリカン; ガン; アンジオモジュリン; 表面プラズモン共鳴; ヘパリン; 硫酸化グリコサミノグリカン; アフリカツメガエル; シンデカン; 硫酸化オリゴ糖

平成十一年度にヒト膀胱癌細胞株ECV-304の細胞表面より単離した[^3H]ヘパラン硫酸(HS)と血管新生調節因子アンジオモジュリンとの相互作用について、ニトロセルロース膜を用いた結合実験を行ない、実際に結合しうることを確認した。また、標識していない各種グリコサミノグリカン鎖やオリゴ糖を同時に加えて阻害実験を行ない、各試料の阻害能の強さを比較し、HSとアンジオモジュリンとの相互作用に必要なHS上の硫酸化構造について情報を得た。この研究成果については、論文として報告した。また、ECV-304細胞の血管様構造の形成に伴って、ECV-304細胞の産生するHSのアンジオモジュリンへの結合能の変化についても調べた。その結果、血管様構造を形成する前のECV-304細胞が産生するHSの方が、血管様構造を形成した後のECV-304細胞が産生するHSよりも、アンジオモジュリンへ結合しやすいことが判明した。このことは、両者の相互作用が血管様構造形成の初期の段階で重要であることを示唆していると考えられる。アンジオモジュリンとHSの相互作用解析については、表面プラズモン共鳴を利用したバイオセンサーを用いて、より反応速度論的な解析も行った。同様の解析は、アンジオモジュリンに留まらず、他の幾つかのヘパリン結合性細胞増殖・分化因子(ヘパリン結合性EGF様増殖因子、ミッドカインなど)についても行った。我々は上記以外に、HSのコアタンパク質への結合領域の構造を微量で解析する方法を開発し、論文としてその成果を発表した。この研究成果は、微量しか得られないアフリカツメガエルの胚のHSや培養細胞の産生するHSの構造解析を行う上で、有効な手段になりうるものと思われる。

The interaction between sulfuric acid (HS) and angiogenesis regulators on the cell surface of bladder cancer cell line ECV-304 in 2011 was confirmed. In addition, the identification of various types of samples is carried out simultaneously with the addition of chemical resistance, the comparison of the strength of chemical resistance of each sample, and the information necessary for the interaction between HS and sulfated structure. The results of this research are reported in the paper. In addition, ECV-304 cells are involved in the formation of vascular structure, the production of HS, the transformation of binding energy, and the regulation of vascular structure. As a result, HS was produced in ECV-304 cells before vascular structure formation, and HS was produced in ECV-304 cells after vascular structure formation. The interaction between the two is important for the initial stage of vascular structure formation. The interaction between the two systems is analyzed in detail, and the resonance of the surface is utilized in detail. The same analysis of the reverse, reverse. In this paper, we develop a new method for analyzing the structure of the joint domain of HS and its quality, and present our achievements. The results of this research include the analysis of HS structure and the development of HS cultured cells.

项目成果

Junko Kishibe: "Structural requirements of heparan sulfate for the binding to the tumor-derived adhesion factor/angiomodulin that induces cord-like structures to ECV-304 human carcinoma cells"Journal of Biological Chemistry. 275(in press). (2000)

Junko Kishibe：“硫酸乙酰肝素与肿瘤源性粘附因子/血管调节蛋白结合的结构要求，诱导 ECV-304 人类癌细胞的索状结构”《生物化学杂志》。

Shuhei Yamada: "Demonstration of glycosaminoglycans in Caenorhabditis elegans"FEBS Letters. 459・3. 327-331 (1999)

Shuhei Yamada：“秀丽隐杆线虫中糖胺聚糖的演示”FEBS Letters 459・3（1999）。

Shuhei Yamada: "Structural studies of octasaccharides derived from the low-sulfated repeating disaccharide region and octasaccharide serines derived from the protein linkage region of porcine intestinal heparin"Biochemistry. 38・2. 838-847 (1999)

Shuhei Yamada：“来自猪肠肝素的低硫酸化重复二糖区域的八糖和来自猪肠肝素的蛋白质连接区域的八糖丝氨酸的结构研究”生物化学38・2（1999）。

Junji Sato: "Identification of cell-binding site of angiomodulin (AGM/TAF/Mac25) that interacts with heparan sulfate on cell surface"Journal of Cellular Biochemistry. 75・2. 187-195 (1999)

Junji Sato：“与细胞表面硫酸乙酰肝素相互作用的血管调节蛋白（AGM/TAF/Mac25）的细胞结合位点的鉴定”细胞生物化学杂志75・2（1999）。

Junko Kishibe: "Structural requirements of heparan sulfate for the binding to the tumor-derived adhesion factor/angiomodulin that induces cord-like structures to ECV-304 human carcinoma cells."Journal of Biological Chemistry. 275・20. 15321-15329 (2000)

Junko Kishibe：“硫酸乙酰肝素与肿瘤来源的粘附因子/血管调节蛋白结合的结构要求，诱导 ECV-304 人类癌细胞的索状结构。”生物化学杂志 275・20 15321-15329。 ）