癌性細胞接着因子の活性発現調節因子であるヘパリン、ヘパラン硫酸の構造と機能の解析

分析肝素和硫酸乙酰肝素的结构和功能，它们是癌细胞粘附因子活性表达的调节剂。

• 批准号: 09772034
• 负责人: 山田 修平
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09772034/
• 关键词: ヘパリン; ヘパラン硫酸; 硫酸化オリゴ糖; アンジオモデュリン; TAF; 血管新生; 硫酸化グリコサミノグリカン; ^1H NMR

癌性細胞接着因子アンジオモデュリンの持つ血管新生促進活性は、ヘパリン(Hep)との相互作用によって阻害されることが証明されているが、そのHepの活性に必要な糖鎖上の微細修飾構造は不明である。構造と活性の相関関係を明らかにするためには、構造が明確に分かったオリゴ糖が必要である。ブタ小腸粘膜由来のHepをヘパリナーゼで徹底消化し、ゲルろ過によって得た八糖画分について構造解析し、その結果、新規の硫酸化八糖の構造を明らかにすることができた。また、オリゴ糖を調製する過程において、Hepオリゴ糖の構造の異性化反応が起こりうることを明らかにした。さらに、ブタ小腸粘膜由来のHep中に混入していたデルマタン硫酸から新規の硫酸化オリゴ糖を単離し、その構造を明らかにした。これらの研究成果はそれぞれ論文として報告した。アンジオモデュリンと種々のHep/ヘパラン硫酸(HS)との直接の結合についても調べた。^3Hで放射標識したHep/HSについて、ニトロセルロース膜を用いた結合実験を行い、アンジオモデュリンとの相互作用に必要な硫酸化修飾構造に関する情報を得た。さらに、培養細胞をもちいて、実際にアンジオモデュリンが血管新生促進活性を示す際におけるHep/HSの関与についても調べた。血管新生とアンジオモデュリンとの関連が知られている細胞(ヒト臍帯由来ECV304細胞)を培養し、ECV304細胞の細胞表面あるいは細胞外マトリックス中にHSが存在することを証明し、その構成二糖組成を決定した。また、ECV304細胞の培地中に種々のHcp/HSを添加して細胞の血管様構造の形成能への影響を顕微鏡下で観察した。上述の結合実験で得られたアンジオモデュリンとの相互作用に必要なHep/HSの硫酸化修飾構造の特徴は、ECV304細胞の血管様構造の形成を阻害するHep/HSの構造の特徴と類似していた。これらの研究成果の一部は学会で報告し、現在論文を作成中である。

Cancerous cells then ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン の hold つ angiogenesis promotes active は, ヘ パ リ ン (Hep) と の interaction に よ っ て resistance against さ れ る こ と が prove さ れ て い る が, そ の Hep の active に necessary な sugar locked の imperceptible unspecified modified structure は で あ る. Tectonic と active phase の masato masato を and Ming ら か に す る た め に は, tectonic が に points clear か っ た オ リ ゴ sugar が necessary で あ る. ブ タ intestinal mucosa origin の Hep を ヘ パ リ ナ ー ゼ で digested し, ゲ ル ろ too に よ っ て た eight sugar painting points に つ い て tectonic analytical し, そ の results, new rules の sulfating eight sugar の tectonic を Ming ら か に す る こ と が で き た. ま た, オ リ ゴ sugar を modulation す る process に お い て, Hep オ リ ゴ sugar の subjects structure の anti 応 が up こ り う る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, ブ origin の タ small intestinal mucosa in Hep に mixed with し て い た デ ル マ タ ン sulfate か ら new rules の sulfating オ リ ゴ sugar を 単 し, そ の tectonic を Ming ら か に し た. Youdaoplaceholder0 れら research results それぞれ それぞれ papers と て て report た た. ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン と kind 々 の Hep / ヘ パ ラ ン sulfate (HS) と の の directly combining に つ い て も adjustable べ た. ^ 3 h で radiation logo し た Hep/HS に つ い て, ニ ト ロ セ ル ロ ー を ス membrane with い た combination be 験 を い, ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン と の に interaction necessary な sulphation modification structure に masato す る intelligence を た. さ ら に, culture cell を も ち い て, be interstate に ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン が angiogenesis promotes active を shown す interstate に お け る Hep/HS の masato and に つ い て も adjustable べ た. Angiogenesis と ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン と の masato even know が ら れ て い る cells (ヒ ト umbilical 帯 origin ECV304 cell) を し, ECV304 cells の surface あ る い は extracellular マ ト リ ッ ク ス に in HS が exist す る こ と を し, そ の constitute a disaccharide composition を decided し た. ま た, ECV304 cell の に of petty is 々 の Hcp/HS を add し て cell の の vascular others structure form can へ の influence を 顕 micro microscopically で 観 examine し た. Above の combined be 験 で have ら れ た ア ン ジ オ モ デ ュ リ ン と の に interaction necessary な Hep/HS の sulphation modification tectonic の 徴 は, ECV304 cell の vascular の form を resistance to harm others in structure す る Hep/HS の tectonic の 徴 と similar し て い た. Youdaoplaceholder6 れら <s:1> research results <e:1> a で society で report <e:1>, and the current paper を is in the process of being completed である.

项目成果

山田修平: "Conversion of N-sulfated glucosamine to N-sulfated mannosamine in an unsaturated heparin disaccharide by non-enzymatic,base-catalyzed C-2 epimerization during enzymatic oligosaccharide preparation." Carboliydrate Research. 309・3. 261-268 (1998)

Shuhei Yamada：“在酶促寡糖制备过程中，通过非酶碱催化 C-2 差向异构化将不饱和肝素二糖中的 N-硫酸化葡萄糖胺转化为 N-硫酸化甘露糖胺”（1998 年）。 ）

山田修平: "Structural studies of octasaccharides derived from the low sulfated repeating disaccharide region and octasaccharide-serines derived from the protein linkage region of porcine intestinal heparin." Biochemistry. 38・2. 838-847 (1999)

Shuhei Yamada：“源自猪肠肝素的低硫酸化重复二糖区域和八糖丝氨酸的结构研究”38・2（1999）。

渡部 美樹: "Characterization of Heparinase from an Oral Bacterium Prevotella heparinolytica." Journal of Biochemistry. 123・2. 283-288 (1998)

Miki Watanabe：“口腔解肝素普雷沃氏菌的肝素酶特性。”《生物化学杂志》123・2（1998 年）。

山田修平: "Structural determination of sulfated tetra-and hexasaccharides containing a rare disaccharide sequence,-3GalNAc(4,6-disulfate)β1-4doAa1-,isorated from porcine intestinal dermatan sulfate." European Journal of Biochemistry. 258・2. 775-783 (1998)

Shuhei Yamada：“从猪肠道硫酸皮肤素中分离出的含有稀有二糖序列 -3GalNAc(4,6-disulfate)β1-4doAa1- 的硫酸化四糖和六糖的结构测定”258・2。 -783 (1998)

山田 修平: "A Major Common Trisulfated Hexasaccharide Core Sequence, Hexuronic Acid (2-sulfate) -Glucosamine (N-sulfate) - Iduronic Acid-N-Acetylglucosamine-Glucuronic Acid-Glucosamine (N-sulfate), Isolated from the Low Sulfated Irregular Region of Porcine In

Shuhei Yamada：“一种主要的常见三硫酸化六糖核心序列，己糖醛酸（2-硫酸盐）-葡萄糖胺（N-硫酸盐）-艾杜糖醛酸-N-乙酰葡萄糖胺-葡萄糖醛酸-葡萄糖胺（N-硫酸盐），从低硫酸化不规则物质中分离出来猪地区