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反応性アストロサイト制御分子PAK2キナーゼの機能解析

反应性星形胶质细胞调节分子PAK2激酶的功能分析

基本信息

批准号：
21K06598
负责人：
小椋正人
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

代謝に伴うROS発生については、神経変性疾患をはじめとする種々の加齢性疾患の発症要因の一つとされている。申請者はこれまでミトコンドリアc-Srcによる呼吸鎖複合体IIのsuccinate dehydrogenase A (SDHA)サブユニットの215番目のチロシンリン酸化がROS産生の抑制に必須の役割を持つことを見出してきた。さらに、アストロサイト群特異的に代謝性ROSの増加を示すSDHAY215Fリン酸化部位変異体発現トランスジェニック（Tg）マウスを作出し、運動協調性の低下、黒質におけるグリア線維性酸性タンパク質（GFAP）、A1アストロサイトマーカーC3および神経毒性因子Tinagl1分子陽性細胞数の増加とチロシン水酸化酵素（TH）陽性神経細胞の減少を引き起こすことを見出した。本研究では、代謝性ROSに起因する反応性アストロサイトによるドパミン神経損傷メカニズムの解明を目的として、アストロサイト由来分泌因子Tinagl1の発現調節メカニズムの解析を行った。マウスTinagl1プロモーターをクローニングした後、ルシフェラーゼ発現ベクターに組込んだ。プロモーター領域の生物データベース解析から複数の転写因子が発現調節に関わることが示唆された。プロモーター領域のデリーション変異体および部分配列変異体を作製し、レポーターアッセイを行ったところ、p53結合領域がTinagl1発現調節に重要な役割を果たしていることが判明した。p53をターゲットとするsiRNAを用いた発現抑制実験を行い、p53がTinagl1発現に関わることを確認した。さらに、In vitroキナーゼアッセイおよびウエスタンブロットを行い、PAK2がp53のリン酸化および安定化に関わることを見出した。これらの解析から反応性アストロサイトにおいてp53を介するPAK2の新規シグナル経路の存在が明らかとなった。

Metabolic factors associated with ROS production are the key factors for the development of neurodegenerative diseases. The applicant responded to the 215-point protocol for succinate dehydrogenase A (SDHA) of respiratory lock complex II, which is essential for inhibiting ROS production. SDHAY215F is the expression of metabolic ROS that are group-specific. It is also the expression of metabolic ROS that are group-specific. It is the expression of metabolic ROS that is group-specific. The number of positive cells for the neurotoxic factor Tinagl1 increased and the number of positive cells for the enzyme TH decreased. This study aims to elucidate the causes of metabolic ROS and the regulation of production by secretory factor Tinagl1. Tinagls1: After the game, the game will be played. The analysis of biological parameters in the field of molecular biology shows that the expression of multiple factors is related to the regulation of molecular biology. In addition to the above, it is also necessary to identify the important effects of Tinagl1 detection regulation in the field of combination. p53 siRNA is used to inhibit the expression of p53 and Tinagl. In vitro, PAK2, p53, p54, p56, p57, p58, p59, p59, p59 The analysis of the new PAK2 protocol reveals the existence of the new protocol.