グリア細胞生存決定因子としてのグルタミントランスポーターに関する分子薬理学的研究

谷氨酰胺转运蛋白作为神经胶质细胞存活决定因素的分子药理学研究

• 批准号: 07J05248
• 负责人: 小椋 正人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J05248/
• 关键词: トランスポーター; アストログリア細胞; ダリア生存因子; 分子薬理学; グルタミン; グリア生存因子; cAMP; プロモーター

ラット大脳皮質由来培養アストログリア細胞には、神経細胞と同様にグルクミントランスポーター(GlnT)が機能的に発現すること、および、アデニル酸シクラーゼ活性化薬であるForskolin曝露に伴い、GlnTプロモーターの活性化を通して、GlnT mRNA発現およびGln輸送活性増強が出現することを以前に示した。さらに、GlnT過剰発現実験からGlnT mRNA発現増強はアストログリア細胞の酸化的ストレス脆弱性を惹起することが判明した。そこで、GlnTによるアストログリア細胞の酸化的ストレス脆弱性惹起メカニズム解明およびアストログリア細胞の機能変化が神経細胞死に与える影響を解析する目的で、GlnT安定発現C6 Glioma細胞株を作製した。まず、GlnT安定発現株においてHPLCを用いて細胞内Gln濃度を測定したところ、著明な細胞内Gln濃度の増加が観察された。さらに、過酸化水素曝露細胞死を検討したところ、PI陽性細胞数の増加が観察された。この時、GlnT抗体を用いた免疫染色法を行ったところ、GlnTたんぱく質は細胞膜上ではなく、細胞間接着面において局在性が観察され、さらに、ROS蛍光指示薬であるHydroethidineを用いてROS産生能を評価したところ、産生能はGlnT安定発現株において著明に増加していた。次に、グルタミン酸誘発性海馬神経細胞死に対するGlnT安定発現株のコンディション培地の影響を解析したところ、著明な回復効果が観察された。そこで、神経栄養因子発現量を解析したところGlnT安定発現株において、NGFおよびNT4/5mRNA発現量の著明な増加が観察された。以上の結果より、C6 Glioma細胞において、GlnTの安定発現は酸化的ストレス脆弱性を惹起すると共に、Glu誘発性神経細胞死に対しては神経栄養因子を介した防御作用を発揮する可能性が示唆された。

The expression of GlnT mRNA and Gln transport activity in cultured human cortical cells and neurons were previously shown to be associated with Forskolin exposure, GlnT activation, GlnT mRNA expression and Gln transport activity. In addition, GlnT mRNA expression was increased in response to cell acidification, which led to the identification of cell vulnerability. In order to analyze the effects of GlnT on neuronal cell death and its function, GlnT stably developed C6 Glioma cell line. The intracellular Gln concentration was measured by HPLC and the increase of intracellular Gln concentration was observed. The number of PI positive cells increased in the first half of 2010, and the number of PI positive cells increased in the second half of 2011. When GlnT antibody is used in immunostaining, GlnT antibody is used in cell membrane and cell interface. ROS light indicator is used in ROS production. Analysis of the effects of acid-induced hippocampal neuronal death on GlnT stability and development in vitro The expression of NGF and NT4/5mRNA was significantly increased in GlnT stable strains. These results suggest that C6 Glioma cells may be vulnerable to the presence of GlnT, and that Glu induced neuronal cell death may play a role in the defense of neurotrophic factors.

项目成果

Exacerbation of oxidative stress vulnerability through upregulation of a glutamine transporter in cultured rat astrocytes

通过上调培养的大鼠星形胶质细胞中谷氨酰胺转运蛋白加剧氧化应激脆弱性

• 发表时间: 2008
• 作者: Masato Ogura;Hideo Taniura;Noritaka Nakamichi;Yukio Yoneda
• 通讯作者: Yukio Yoneda

Upregulation of the glutamine transporter through transactivation mediated by cAMP/protein kinase A signals toward exacerbation of vulnerability to oxidative stress in rat neocortical astrocytes

通过 cAMP/蛋白激酶 A 介导的反式激活上调谷氨酰胺转运蛋白，加剧大鼠新皮质星形胶质细胞对氧化应激的脆弱性

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Cellular Physiology 212(2)
• 作者: Masato Ogura;et. al.
• 通讯作者: et. al.

培養アストログリア細胞に発現するグルタミントランスポーターに対するcAMPシグナルの影響

cAMP信号对培养的星形胶质细胞表达的谷氨酰胺转运蛋白的影响

• 发表时间: 2008
• 作者: 小椋 正人;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Theanine, an ingredient of green tea, inhibits [3H]glutamine transport in neurons and astroglia in rat brain

• DOI: 10.1002/jnr.21637
• 发表时间: 2008-06-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROSCIENCE RESEARCH
• 影响因子: 4.2
• 作者: Kakuda, Takami;Hinoi, Eiichi;Yoneda, Yukio
• 通讯作者: Yoneda, Yukio

Activator protein-1 responsive to the group II metabotropic glutamate receptor subtype in association with intracellular calcium in cultured rat cortical neurons

• DOI: 10.1016/j.neuint.2007.04.025
• 发表时间: 2007-12
• 期刊: Neurochemistry International
• 影响因子: 4.2
• 作者: Chie Sugiyama;N. Nakamichi;M. Ogura;Eriko Honda;S. Maeda;H. Taniura;Y. Yoneda