新規アルギニン水酸化酵素の電子伝達系の同定と抗結核薬の大量生産システムの確立

点击翻译按钮获取中文摘要

本年度は, 昨年度構築した発現系を利用して, フェレドキシン（FDX）およびFDX還元酵素（FDR）を精製し, D-サイクロセリン（D-CS）生合成に関与する新規アルギニン水酸化酵素DcsAの電子伝達系を明らかにするとともに, 抗癌剤ヒドロキシウレア（HU）の大腸菌を宿主とした生産系を構築することを目標として研究を実施した。まず, 昨年度構築した発現系を利用して, 各FDX（7種）およびFDR（2種）の発現性をSDS-PAGEにより調査した。その結果, 3種のFDX（Sla_0278, Sla_2106, Sla_5080）, および, 2種のFDR（Sla_0456, Sla_5644）が可溶性タンパク質として発現することが明らかになった。そこで, クロマトグラフィーの手法を用いることにより, これらタンパク質の精製を行った。その結果, 全てについて, ほぼ単一タンパク質として精製することに成功した。続いて, 精製したタンパク質について, 吸収スペクトル解析（260～600 nm）を実施した。その結果, 3種のFDXのうち, Sla_0278およびSla_5080については, 鉄/硫黄タンパク質に特徴的な吸収スペクトルが観測されたが, Sla_2106については観測されなかった。一方, 2種のFDRについては, フラビンタンパク質に特徴的な吸収スペクトルは観測されなかった。以上本年度においては, FDXおよびFDRをほぼ単一タンパク質として取得したが, FDRについては活性型と考えられるタンパク質を取得できなかった。そのため, 当初の研究計画では目標を達成することが困難になったので, 次年度は方針を変更して研究を継続する。