長鎖ノンコーディングRNA Malat1による分枝形態形成の調節機構の解明

长非编码RNA Malat1阐明分支形态发生的调控机制

• 批准号: 21K06762
• 负责人: 林 徹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06762/
• 关键词: Malat1; 顎下腺; RNA; 形態形成; 長鎖ノンコーディングRNA; 分枝形態形成

上皮が枝分かれを繰り返しながら伸長していく形づくりの様式は分枝形態形成と呼ばれ、そのモデル器官としては胎仔マウスの顎下腺が知られています。研究代表者はこれまでに胎仔マウス顎下腺を材料とし、遺伝子の発現レベルを調節するRNA（具体的には、タンパク質をコードしないノンコーディングRNA）が分枝形態形成に与える影響について調べてきました。本研究課題ではノンコーディングRNAのうち、200塩基以上の長鎖RNAを研究対象としています。Malat1は長鎖ノンコーディングRNAのひとつですが、分枝形態形成に関与することは知られていません。そのような中、予備実験にてMalat1が分枝形態形成を調節しうること見出しました。そこで当該年度はMalat1のin situ hybridization による局在解析を中心に進めました。方法としてはまず、Malat1の塩基配列をデータベースから取得し、プライマーを作成しました。つぎに作成したプライマーを用いてMalat1 転写産物の一部と相補的に結合するプローブを合成しました。一方、胎仔マウス顎下腺については急速凍結させて薄い切片を用意しました。プローブを切片に滴下し反応させると、Malat1が発現している細胞や組織が青く染色されます（in situ hybridization）。その結果、顎下腺の発生ステージによってMalat1の発現レベルや発現部位が大きく変動することが示唆されました。このことから分枝形態形成をはじめとする顎下腺の発生過程にMalat1が寄与している可能性が考えられます。

上皮反复生长并在其分支时延伸的方式称为分支形态发生，并且胎儿小鼠的下颌腺被称为模型器官。研究人员先前使用胎儿小鼠的下颌腺体作为材料，研究了调节基因表达水平（具体而非编码蛋白质的非编码RNA）对分支形态发生的RNA的影响。该研究主题着重于200多个非编码RNA基础的长链RNA。 MALAT1是长链非编码RNA之一，但众所周知与分支形态发生有关。在这种情况下，初步实验发现MALAT1可以调节分支形态发生。因此，在这个财政年度，我们专注于使用Malat1的原位杂交进行定位分析。该方法是首先从数据库中获得Malat1的基本序列并创建引物。接下来，我们合成了与Malat1转录本的一部分结合的探针。另一方面，通过快速冷冻为胎儿小鼠的下颌腺制备薄切片。当将探针添加到截面并反应时，表达Malat1的细胞和组织为蓝色（原位杂交）。结果表明，MALAT1的表达水平和位点差异很大，具体取决于下颌下腺的发育阶段。这表明MALAT1可能有助于下颌腺的发育过程，包括分支形态发生。