長鎖ノンコーディングRNA Malat1による分枝形態形成の調節機構の解明

上皮が枝分かれを繰り返しながら伸長していく形づくりの様式は分枝形態形成と呼ばれ、そのモデル器官としては胎仔マウスの顎下腺が知られています。研究代表者はこれまでに胎仔マウス顎下腺を材料とし、遺伝子の発現レベルを調節するRNA（具体的には、タンパク質をコードしないノンコーディングRNA）が分枝形態形成に与える影響について調べてきました。本研究課題ではノンコーディングRNAのうち、200塩基以上の長鎖RNAを研究対象としています。Malat1は長鎖ノンコーディングRNAのひとつですが、分枝形態形成に関与することは知られていません。そのような中、予備実験にてMalat1が分枝形態形成を調節しうること見出しました。そこで当該年度はMalat1のin situ hybridization による局在解析を中心に進めました。方法としてはまず、Malat1の塩基配列をデータベースから取得し、プライマーを作成しました。つぎに作成したプライマーを用いてMalat1 転写産物の一部と相補的に結合するプローブを合成しました。一方、胎仔マウス顎下腺については急速凍結させて薄い切片を用意しました。プローブを切片に滴下し反応させると、Malat1が発現している細胞や組織が青く染色されます（in situ hybridization）。その結果、顎下腺の発生ステージによってMalat1の発現レベルや発現部位が大きく変動することが示唆されました。このことから分枝形態形成をはじめとする顎下腺の発生過程にMalat1が寄与している可能性が考えられます。

上皮が枝分かれを繰り返しながら伸長していく形づくりの様式は分枝形態形成と呼ばれ、そのモデル器官としては胎仔マウスの顎下腺が知られています。研究代表者はこれまでに胎仔マウス顎下腺を材料とし、遺伝子の発現レベルを調節するRNA（具体的には、タンパク質をコードしないノンコーディングRNA）が分枝形態形成に与える影響について調べてきました。本研究課題ではノンコーディングRNAのうち、200塩基以上の長鎖RNAを研究対象としています。Malat1は長鎖ノンコーディングRNAのひとつですが、分枝形態形成に関与することは知られていません。そのような中、予備実験にてMalat1が分枝形態形成を調節しうること見出しました。そこで当該年度はMalat1のin situ hybridization による局在解析を中心に進めました。方法としてはまず、Malat1の塩基配列をデータベースから取得し、プライマーを作成しました。つぎに作成したプライマーを用いてMalat1 転写産物の一部と相補的に結合するプローブを合成しました。一方、胎仔マウス顎下腺については急速凍結させて薄い切片を用意しました。プローブを切片に滴下し反応させると、Malat1が発現している細胞や組織が青く染色されます（in situ hybridization）。その結果、顎下腺の発生ステージによってMalat1の発現レベルや発現部位が大きく変動することが示唆されました。このことから分枝形態形成をはじめとする顎下腺の発生過程にMalat1が寄与している可能性が考えられます。