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複数のがん分子標的治療薬の効果を左右する薬剤耐性・感受性規定因子の統合的研究

影响多种癌症分子靶向治疗药物有效性的耐药、敏感决定因素的综合研究

基本信息

批准号：
21K07226
负责人：
杉本芳一
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

WEE1阻害薬adavosertib、CHK1阻害薬prexasertibは、細胞周期のG2/Mチェックポイントに作用して抗腫瘍効果を示す。ヒト乳がんMCF-7細胞より樹立したadavosertib耐性細胞およびprexasertib耐性細胞は、adavosertibおよび3種のCHK1阻害薬に数倍から数十倍の交差耐性を示した。cDNA microarray解析より、これらの耐性細胞でPI3K-AKT経路の活性化が示唆された。また、AKT阻害薬は耐性細胞のadavosertib耐性を低下させた。Myr-AKT1を強制発現させたMCF-7細胞は、adavosertibと3種のCHK1阻害薬に耐性を示した。以上より、AKTはWEE1阻害薬およびCHK1阻害薬の効果規定因子であると考えられた。Rho GTPase-activating proteinのファミリーに属するSYDE1がP-糖タンパク質（P-gp）と結合することを示した。SYDE1を強制発現させたヒト胎児腎HEK293細胞およびヒト大腸がんSW620-14-4細胞で、P-gpの発現量の増大が観察された。しかしMDR1 mRNAの発現量には変化がなかった。SYDE1導入細胞のvincristineおよびdoxorubicinに対する耐性度の比較から、SYDE1はP-gpのこれらの薬剤の基質認識には影響しないと考えられた。SW620-14-4細胞をcycloheximide処理すると、細胞膜上のP-gpの発現が減少したが、SYDE1導入細胞ではP-gpの発現量は変わらなかった。以上より、SYDE1はP-gpの細胞膜上の安定性を向上させてP-gpの発現量を増大させたと考えられた。ヒト大腸がんHCT116細胞にSLUG遺伝子を導入して上皮間葉転換（EMT）を誘導した116/slug細胞は、幹細胞性を有するSP細胞を高率に含み、種々の抗がん剤に耐性を示した。116/slug細胞およびヒト肺がんA549細胞に含まれるSP細胞の割合は、HDAC6の阻害活性を持つ3種のHDAC阻害薬の処理により低下した。116/slug細胞、A549細胞をHDAC6のsiRNAで処理すると、SP細胞の割合が低下した。以上より、これらの細胞のSP細胞の維持にはHDAC6が関与していることが示唆された。

WEE1 inhibitor adavosertib, CHK1 inhibitor prexasertib, cell cycle G2/M interaction and anti-tumor effect were demonstrated. MCF-7 cells are resistant to adavosertib and prexasertib, and adavosertib cells are resistant to three kinds of CHK1. cDNA microarray analysis showed that the PI3K-AKT pathway was activated in resistant cells. The adavosertib tolerance of AKT resistant cells is low. Myr-AKT1 stress response in MCF-7 cells was shown to be resistant to adavosertib and CHK1 inhibitors. AKT WEE1 resistance factor and CHK1 resistance factor Rho GTPase-activating protein belongs to SYDE1 and P-gp. SYDE1 stress was detected in HEK293 cells and in SW620 -14-4 cells, and increased P-gp production was observed. The expression of MDR1 mRNA was detected by PCR. Comparison of vincristine and doxorubicin-mediated tolerance of SYDE1-introduced cells, and effects of SYDE1-induced P-gp on matrix recognition SW620 -14-4 cells were treated with cycloheximide, and the expression of P-gp on the cell membrane decreased. SYDE1 cells were treated with cycloheximide, and the expression of P-gp decreased. The stability of SYDE1 on the cell membrane of P-gp was increased, and the expression of P-gp was increased. The introduction of SLUG gene into large intestine HCT116 cells induced epithelial mesenchymal transition (EMT) in 116/slug cells and SP cells with stem cell properties showed high rates of cell resistance and resistance. 116/slug cells contain SP cells and HDAC6 cells. The inhibitory activity of HDAC6 cells is decreased by treatment with three HDAC inhibitors. When 116/slug cells and A549 cells were treated with HDAC6 siRNA, the cleavage of SP cells was reduced. The above mentioned cells and SP cells are maintained in HDAC6.