癌および正常細胞の抗癌剤感受性を規定するサプレッサー型耐性因子の同定

鉴定决定癌症和正常细胞对抗癌药物敏感性的抑制型耐药因子

• 批准号: 12217153
• 负责人: 杉本 芳一
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217153/
• 关键词: 抗癌剤耐性; レトロウイルス; G-protein受容体; Adriamycin; Paclitaxel

本研究では、遺伝子の機能不全あるいは発現低下による耐性化に関与する遺伝子の同定を試みた。マウスNIH3T3細胞のcDNAをLNCXレトロウイルスベクターに組み込んだライブラリーをNIH3T3細胞に導入し、種々の抗癌剤で選択して耐性クローンを得た。得られた抗癌剤耐性クローンに組み込まれたプロウイルスに挿入されていたcDNAを解析した結果、NADH-ubiquinone oxidoreductaseのchain5のアンチセンスを発現する細胞がAdriamycin耐性を示すこと、vacuolar assembly protein VPS41の部分ペプチドを発現する細胞がpaclitaxel耐性を示すことなどが明らかになった。また、Adriamycin耐性クローンAc2株は1.2kbの新規遺伝子断片を組み込んでいた。この遺伝子をTASPと名付けた。ヒト、マウスのTASP全長cDNAがコードする蛋白はともに450アミノ酸よりなり、細胞膜を7回貫通する構造をもつG-protein受容体と推定された。TASPの発現は調べた全組織で見られたが、とりわけtestisで高い発現を示した。Ac2株に組み込まれていたretrovirusはTASPの3'側のantisenseを発現するものであったが、このantisense発現retrovirusを新たに構築してNIH3T3細胞に導入してG418で選択したところ、遺伝子導入細胞はAdriamycinに1.5倍の耐性を獲得した。さらに、ヒトTASPの全長cDNAをpHa-IRES-DHFRベクターに組み込み、NIH3T3細胞に導入後、methotrexateで選択して遺伝子導入細胞を得た。遺伝子導入細胞で50-kilodaltonのTASP蛋白の発現が見られ、この細胞はAdriamycinに1.4倍高感受性であった。以上より本研究で単離された新規遺伝子TASPは細胞のAdriamycin感受性に関与していると推定された。

In this study, we tried to identify the relationship between tolerance and genetic stability due to incomplete gene function and low gene expression. The cDNA of NIH 3T3 cells was introduced into NIH 3T3 cells, and the anti-cancer agent was selected and obtained. The results of cDNA analysis of anti-cancer resistance gene groups, expression of NADH-ubiquinone oxidase chain5 and expression of some proteins of vacuolar assembly protein VPS41 in cells with Adriamycin resistance were obtained. Adriamycin resistant strain Ac2 contains 1.2kb new gene fragment. This is the legacy of TASP and its name is paid. The TASP full-length cDNA was putative as a G-protein receptor. TASP's development is not only in the whole organization, but also in the whole organization. Ac2 strain was introduced into NIH 3T3 cells and 1.5-fold more resistant to Adriamycin than TASP. In addition, the full length cDNA of TASP was transformed into NIH 3T3 cells by pHa-IRES-DHFR. The expression of 50-kilodalton TASP protein was observed in transfected cells, and the sensitivity of Adriamycin was 1.4 times higher in transfected cells. The above results suggest that the new gene TASP is related to Adriamycin sensitivity in cells.

项目成果

Nakane,M.: "Preclinical Pilot Runs toward the Clinical Study of MDR1 Gene Therapy."Proceeding of the 6th Annual Meeting of the Japan Society of Gene Therapy. 6. 76 (2000)

Nakane,M.：“MDR1 基因治疗临床研究的临床前试点。”日本基因治疗学会第六届年会论文集。

Takahashi,S.: "Retroviral Gene Transfer of Multiple Drug Resistance (MDR) 1 cDNA to Osteoclasts."Proceeding of the 6th Annual Meeting of the Japan Society of Gene Therapy. 6. 124 (2000)

Takahashi,S.：“多重耐药性 (MDR) 1 cDNA 的逆转录病毒基因转移至破骨细胞。”日本基因治疗学会第六届年会论文集。

Yanase,K.: "Identification and characterization of a deletion mutant of DNA topoisomerase I mRNA in a camptothecin-resistant subline of human colon carcinoma."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 551-559 (2000)

Yanase,K.：“人类结肠癌喜树碱抗性亚系中 DNA 拓扑异构酶 I mRNA 缺失突变体的鉴定和表征。”Jpn.J.Cancer Res.. 91. 551-559 (2000)

Takeshita,A.: "Role of P-glycoprotein in all-trans retinoic acid (ATRA) resistance in acute promyelocytic leukaemia cells : analysis of intracellular concentration of ATRA."Br.J.Haematol.. 108. 90-92 (2000)

Takeshita,A.：“P-糖蛋白在急性早幼粒细胞白血病细胞全反式视黄酸 (ATRA) 抗性中的作用：ATRA 细胞内浓度的分析。”Br.J.Haematol.. 108. 90-92 (2000)

杉本芳一: "乳癌に対するMDR遺伝子を用いた骨髄保護療法"Current Therapy. 6 (2001)

Yoshikazu Sugimoto：“使用 MDR 基因治疗乳腺癌的骨髓保护疗法”Current Therapy 6 (2001)。