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多発性嚢胞腎患者由来腎オルガノイドを用いたGSK3β PIポリアミドの創薬

利用多囊肾病患者的肾类器官发现 GSK3β PI 聚酰胺的药物

基本信息

批准号：
21K08265
负责人：
福田昇
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はGSK3βプロモーターの転写因子CREBを抑制するPIポリアミドが、より有効に常染色体優性多発性嚢胞腎(ADPKD)の嚢胞形成抑制が出来る事を認めた。そこで今回ADPKD患者由来疾患特異的iPS細胞を樹立し、その後腎オルガノイドを誘導し、腎オルガノイドの増殖に対するGSK3βPIポリアミドの効果を検討し創薬開発を行ってきた。今回は共同研究にて環状型PIポリアミドがヘアピン型よりも2本鎖DNAの結合が安定しており、1オーダー低濃度で遺伝子発現抑制効果を示す事を認めた。ヒトGSK3βPIポリアミド分子設計としてヒトGSK3βプロモーター構造のCREB結合配列をソフトウエアPROMOにて解析し、PIポリアミドを複数分子設計した。次にADPKD患者および健常人から単核球を分離し、山中４因子センダイウイルスベクターを感染させiPS細胞を得た。このiPS細胞からFGF9で分化開始から7日後細胞を培養皿より分離し、遠心分離により試験管内において再集合体を形成させたのち、メンブレンフィルターのうえで最長で20日間にわたり3次元培養した。再集合体は成長し、3日目には腎包の形成がみられ、11日目にはネフロンを自発的に構築する直径3～5mm程度のADPKD患者オルガノイドが形成された。令和4年度はADPKD患者由来疾患特異的iPS細胞からの尿細管上皮細胞を得た。ADPKD患者由来疾患特異的iPS細胞からの尿細管上皮細胞とコントロールとしての尿細管上皮細胞の遊走能の比較実験を行った。ADPKD患者由来尿細管上皮細胞とコントロール尿細管上皮細胞増殖をdDAVP 1μM投与後、WST-1アッセイで細胞増殖を行い、1μM～0.1μM 6種類のヒトGSK3βPIポリアミドの効果を評価しリード化合物を決定した。

I 々は GSK3 beta プロモーターの planning write factor after CREB を inhibit する PI ポリアミドが, より have sharper に autosomal dominance multiple 発嚢 cell renal (ADPKD) の嚢 cell formation inhibition が out る matter を recognize めた. そこで today back to the origin ADPKD patients disease specific iPS cells をし, その after kidney オルガノイドを induced し, kidney オルガノイドの raised colonization にす seaborne る GSK3 beta PI ポリアミドの unseen fruit を beg し検 gen 薬 open 発を line ってきた. Today back to は joint research にて ring type PI ポリアミドがヘアピン type よりも 2 this lock の combined with DNA が settle しており, 1 オーダー traces of low concentration で伝 son 発 inhibition of unseen fruit を now shown す matter を recognize めた. ヒト GSK3 beta PI ポリアミド molecular design としてヒト GSK3 beta プロモータのー structure after CREB combined with column をソフトウエア PROMO usage にて analytical し, PI ポリアミドを complex molecular design した. Time に ADPKD patients および healthy normal から単 nuclear ball を separation し, four factors in mountain センダイウイルスベクターを infection させたを iPS cells. この iPS cells から FGF9 で differentiation began から 7 を cells in a petri dish typically increases in the future より separation し, telecentric separation により test tube において collection again を form させたのち, メンブレンフィルターのうえでで longest 20 day にわたり three yuan culture した. To aggregate は growth し, 3 eyes には renal package の form がみられ, 11 eyes にはネフロンを from 発に build する degree of 3 ~ 5 mm diameter の ADPKD patients オルガノイドが form された. In the 4th year of the Reiwa era, patients with <s:1> ADPKD developed disease-specific iPS cells, including ら and を urinary tubule epithelial cells, resulting in た. ADPKD patients origin disease specific iPS cells からの urine tubule epithelial cells とコントロールとしての urine tubule epithelial cells の wander の is be 験を line った. ADPKD patients origin urine tubule epithelial cells とコントロール urine tubule epithelial cells raised colonization を dDAVP, after 1 mu M cast and WST - 1 アッセイで cell line をい rights colonization, 1 mu M ~ 0.1 mu M 6 kinds のヒト GSK3 beta PI ポリアミドの unseen fruit を review 価しリード compound を decided した.