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若年性骨髄単球性白血病におけるPTPN11遺伝子変異によるメチル化調節機構の解明

阐明幼年粒单核细胞白血病PTPN11基因突变的甲基化调控机制

基本信息

批准号：
21K08368
负责人：
松田和之
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、PTPN11変異によるメチル化調節機構の解明することである。これまでにPTPN11変異の有無のみ異なるJMML由来iPS細胞を樹立し、各iPS細胞について変異を修復したiPS細胞および変異を修復したiPS細胞も作製している。直接的にPTPN11変異によるメチル化への影響・機構を解析できる最適な研究試料を使用して研究が遂行できる。網羅的メチル化解析（ビーズアレイ）の委託解析を計画していたため、高濃度のゲノムDNAが必要であるため各iPS細胞からのCD34陽性細胞の分化誘導について培養条件やサイトカイン添加条件を検討してきた。2022年度末に網羅的メチル化解析（ビーズアレイ）の委託が可能となった。2022年度の研究成果は、iPS細胞からCD34陽性細胞を分化する際の4種類のサイトカイン濃度を各2倍量に増加し、さらに、回収時のピペットでの剥離と分散操作を繰り返すなどの操作上の細かい点まで調整することにより回収細胞数を増加させることができ、高濃度のゲノムDNAを回収できるようになった。本疾患関連の遺伝子について、Bisulfite処理・シークエンス解析による予備的なメチル化解析を行い、学会発表を行った（第69回日本臨床検査医学会学術集会、栃木県）。そして、2022年度末に網羅的メチル化解析（ビーズアレイ）をタカラバイオ株式会社への委託することができた。2023年度早期に解析が終了し、データ納品される（2022年度の残助成金と2023年度の助成金を合わせて支払いを行う予定である）。2023年度には、CpGアイランド、遺伝子、およびプローブ別のメチル化率の違いについて比較解析を行う予定である。

The purpose of this study is to clarify the mechanism of PTPN11 differentiation. The JMML was created by iPS cells and repaired by iPS cells. Direct analysis of PTPN11 changes in the structure of the study, the use of the most suitable sample, and the implementation of the study. The commission analysis of the network of CD34 positive cells was planned and high concentrations of DNA were necessary for differentiation induction of iPS cells. Culture conditions and addition conditions were discussed. At the end of 2022, the company's annual sales volume reached 1.5 billion US dollars. The research results of 2022 include: the concentration of four kinds of cells in iPS cells during differentiation of CD34-positive cells increased by 2 times, the concentration of DNA increased by 2 times, and the concentration of DNA increased by 2 times. This disease related genetic analysis, bisulfid processing, analysis, preparation, analysis, and development of the association table (69th Japan Association of Clinical Laboratory Medicine Academic Conference, Tochigi) For the year ended FY2022, the company was entrusted with the following tasks: The analysis of the early part of the year 2023 will be completed and the products will be accepted (the residual component of the year 2022 and the joint component of the year 2023 will be determined). In 2023, the comparison and analysis of CpG, CpG