末梢血中の微量白血病細胞定量検出に有用なエマルジョンPCR法の確立と臨床応用

乳剂PCR定量检测外周血痕量白血病细胞方法的建立及临床应用

• 批准号: 21931033
• 负责人: 松田 和之
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21931033/
• 关键词: 遺伝子変異特異的定量PCR法; 微量白血病細胞; エマルジョンPCR法

白血病など血液疾患に対する化学療法後の治療反応性や骨髄移植後の再発評価において、微小残存病変の評価は、重要である。また、原発巣以外での再発を考えると循環末梢血中に存在する腫瘍細胞を早期に高感度に検出・定量することは有用と考えられる。これまで遺伝子変異(主に一塩基変異)を腫瘍細胞マーカーとした遺伝子変異特異的PCR法を検討し、ロック核酸(locked nucleic acid, LNA)およびミスマッチ塩基を含有する遺伝子変異特異的プライマーを使用することで、特異度および感度が高いPCR法を検討してきた。本研究では、定重的な評価を行うことを目的としてLNA、ミスマッチ含有プライマーを使用したエマルジョンPCR法とPCR産物を蛍光量として定量する反応系の検討を行った。エマルジョン作製では、ミネラルオイル、非極性界面活性剤および乳化剤を使用し、超音波装置、微小ビーズを用いた懸濁方法などを試行した。しかし、エマルジョン状態が長時間持続せず、PCRを行うと初期ステップ(変性過程)で既にエマルジョン状態が消失していた。簡便かっPCRに適したエマルジョン作製のために試薬組成や懸濁方法の検討がさらに必要である。そのため、その後の定量的評価を目的とした検出系の検討では、プライマー固相化ビーズを用いてPCRを行う替わりに、はじめにLNA、ミスマッチ含有変異特異的プライマーとFAM標識共通プライマーを用いて遺伝子変異特異的PCR法を行った後に、正常配列特異的なプローブを固相化したビーズとPCR産物をハイブリダイゼーションさせ、ビーズを遠心回収した後に再溶解し蛍光量を測定した。野生型DNAに変異型DNAを混和した希釈系列を用いて、感度および特異度を検討した結果、0.01%～0.001%の変異型DNAを検出できた。また、野生型DNAには反応が認められなかった。正確な定量性が今後の課題である。

Leukemia patients with hematological disorders were treated with chemical methods. After reverse bone transplantation, patients with leukemia were retreated, minimal residual diseases, and important diseases. In addition to the original and the original, the results showed that there was a high sensitivity in the peripheral blood. The PCR method (locked nucleic acid, LNA), nucleic acid (locked nucleic acid, DNA), nucleic acid (DNA, DNA), nucleic acid (DNA, DNA In this study, the objective of this study is to determine the amount of light, the quantity of light, the quantity of light, the amount of light, the amount of light, The use of ultrasound devices, micro-devices, micro-methods, non-sexual interfacial activity, emulsification, use, ultrasound devices, ultrasound devices, ultrasound devices, The status of each patient has been affected for a long time, and the status of the PCR has disappeared in the early days of the operation. If you want to PCR, you will need to make sure that you need to make sure that you have the necessary information to do so. The purpose of this paper is to use the method of PCR to replace the data of PCR, which contains specific information about the common knowledge of FAM. In the normal configuration of the special device, the solid phase is used, the PCR is used, and the photometry is redissolved after the recovery of the heart. The results of wild-type DNA virus-type DNA mixed with wild-type DNA and sensitivity-specific test results, 0.01% and 0.001%, respectively. Wild type DNA, wild type, wild type. It is correct to quantify the problem in the future.