膠芽腫の遊走能亢進における細胞質内インポーティンα１関連ダイナミクスの解明

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2022年度はインポーティンα1遺伝子のノックアウト細胞において、遊走関連因子の発現についての探索を継続するとともに、Wound Healing Assay (WHA)やナノファイバーを用いた遊走実験による観察を行った。また、マウスを用いたin vivo実験のためのノックアウト細胞の増殖および安定したノックアウト遺伝子/タンパクの維持を行った。U87およびU251株を用いた実験で、悪性度の高い細胞で発現や細胞質内の局在に変化がみられるとされるインテグリンβ1は、インポーティンα1遺伝子のノックアウト細胞において細胞突起への細胞内輸送が制限されていた。WHAによる細胞遊走観察の結果から、現在報告されている悪性度や遊走に関連した因子の中で、細胞骨格や接着因子が関係していることが予測された、接着因子であるCADM1は、ノックアウト細胞でWestern Blotting法によるタンパク量が増加が確認された。免疫染色においても特に細胞体において強いCADM1の発現がみられ、同様の結果であった。WHAにおいては、腫瘍は単独での遊走の割合が減少し、突起を伸ばすも前方に遊走できないといった状態の観察がなされた。このようにWHAでは細胞接着能の亢進や遊走に制限がみられたが、ナノファイバーを用いたシングルセルの観察では遊走の明らかな制限は観察されなかった。本年後のin vivo実験の準備として、ノックアウト細胞は凍結保存後の継代においても遊走やWestern Blotting法でのタンパク量の変化において、変異した機能を維持していたことが確認された。