破骨細胞におけるDAP12を介したITAMシグナル経路を制御する分子機構の解明

阐明控制破骨细胞中 DAP12 介导的 ITAM 信号通路的分子机制

• 批准号: 21K09299
• 负责人: 北川 教弘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09299/
• 关键词: 骨代謝; 破骨細胞; シグナル伝達; 免疫学; 糖鎖

本研究は破骨細胞分化に重要なSiglec-15-DAP12複合体を介したシグナル系と転写因子NFATc1の関連を分子レベルで解明し、１）骨吸収活性を有する破骨細胞が形成される分子機序の理解、および２）Siglec-15を標的とする治療法開発への応用に貢献することを目的としている。当該年度は下記2項目の成果を得た。１）破骨細胞における（Siglec-15に結合するDAP12）/（全DAP12量）の算出を試みた。RAW264細胞からin vitroで分化誘導した破骨細胞から細胞抽出液を作成し、抗Siglec-15抗体でimmunodepletionを行った。免疫沈降前後の上精を抗Siglec-15抗体でウェスタンブロットした結果、Siglec-15量は免疫沈降前と比較して16%まで減少していたのに対し、DAP12は86%に減少が止まった。同時に対照抗体ではSiglec-15、DAP12ともに免疫沈降前後でほぼ変わらなかった。このことは破骨細胞で発現するDAP12の大部分がSiglec-15と会合していないことを示唆する。２）多発性骨嚢胞と白質脳症による認知症を呈する那須・ハコラ病は劣性遺伝疾患であり、DAP12はその原因遺伝子の一つとして見出されている。またDAP12 遺伝子欠損マウスは視床領域でオリゴデンドロサイトの成熟に障害を原因とする髄鞘形成不全を呈することが報告されている。そこで13週齢Siglec-15遺伝子欠損マウスの視床領域切片を作成し、抗ミエリン結合タンパク質抗体にて免疫染色した。その結果Siglec-15遺伝子欠損マウスの染色像は野生型と差が認められなかった。

The purpose of this study is to elucidate the molecular relationship between the Siglec-15-DAP12 complex and NFATc1, which is important for osteoclast differentiation; 1) to understand the molecular mechanisms involved in osteoclast formation, which are responsible for bone resorption activity; and 2) to contribute to the development of Siglec-15-targeted therapies. The results of the following projects were recorded during the year. 1) Calculation of osteoclast binding (Siglec-15)/(total DAP-12) RAW264 cells were induced to differentiate into osteoclasts by vitro culture and anti-Siglec-15 antibodies were prepared. Before and after immune sedimentation, the amount of anti-Siglec-15 antibody decreased by 16% compared with that before immune sedimentation, and the amount of DAP-12 decreased by 86%. At the same time, the control antibodies changed before and after immune sedimentation of Siglec-15 and DAP12. Most of the DAP12 cells were found to be Siglec-15. 2) Multiple bone marrow disorders and linear disorders are the cause of cognitive disorders. DAP12 has been reported as a failure to mature in the field of vision. The 13-week-old Siglec-15 gene was used to prepare sections of the optic bed, and the anti-Siglec-15 protein was used to immunostain the optic bed. The results of Siglec-15 gene mutation are as follows: