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破骨細胞のシグナル伝達制御解明(G蛋白質を介するレセプターキナーゼ遺伝子の解析)

破骨细胞信号转导控制的阐明（G蛋白介导的受体激酶基因分析）

基本信息

批准号：
07672021
负责人：
久木田明子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
佐賀医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672021/
关键词：
破骨細胞クローニング PCR

项目摘要

本研究においては、破骨細胞の膜表面に存在するG蛋白質を介したレセプターのレセプターキナーゼのcDNAをクローニングすることを目的とした。そのために、まず、我々が既に作製した破骨細胞を特異的に認識するモノクローナル抗体Katlに陽性細胞のcDNAライブラリーを用いてクローニングを行うことを試みた。はじめに、このライブラリーが破骨細胞特異的であり、G蛋白質を介したレセプターであるカルシトニンのレセプターを発現しているかどうかを調べた。オーストラリアのDr.Sextonよりラットのカルシトニンレセプター(Cla)のcDNAを頂き、インサートより、polyAを除くプローブを作製し、それを用いてKatl陽性細胞のcDNAライブラリー(約1.5X105)をスクリーニングしたところ、6個の陽性クローンが得られた。この6個の陽性クローンについて、カルシトニンレセプターの膜貫通領域に相当するプライマーを作製し、PCR反応と、そのSouthern hybridizationを行ったところ4つのクローンについて陽性のバンドが得られた。また、これらのクローンについて一部の配列を決定したところ、カルシトニンレセプターの配列と一致した。これらの結果から、このKatl陽性細胞のcDNAライブラリーは、カルシトニンのレセプターを高頻度に発現しており、それをリン酸化するレセプターキナーゼも高頻度の発現していることが考えられた。そこで、既に報告されているヒトのレセプターキナーゼの活性部位のよく保存されている領域から二種類のプライマーを作製した。まず、一つのプライマーを用いてKatl陽性細胞のcDNAライブラリーをテンプレートとしPCR反応を行った後、その反応液をテンプレートとしさらにもう一つのプライナーを用いてPCR反応を行った。相当する長さのバンドを切り出しpBluscriptにクローニングし、その塩基配列を解析中である。

The purpose of this study is to investigate the presence of G protein on the membrane surface of osteoclasts. The expression of cDNA in osteoclast cells was detected by ELISA. The expression of G protein in osteoclast specific cells is regulated by the expression of G protein in osteoclast. The cDNA of Cla was produced by using the cDNA of Katl positive cell (about 1.5X105). The cDNA of Cla was produced by using the cDNA of Cla (about 1.5X105). These six positive genes were identified by PCR amplification, Southern hybridization, and so on. The arrangement of a part of the film is determined by the arrangement of the film The results showed that the cDNA of Katl-positive cells was highly frequent. In this paper, we report that the active sites of the two species are preserved in the middle of the field. The cDNA of Katl-positive cells was used in the PCR reaction. The PCR reaction was used in the PCR reaction. The corresponding length of the file is cut out of the pBluscript file, and the base is arranged in the analysis.