排卵や卵胞成熟を引き起こすGnRHニューロンの周期的活動のメカニズムの解明

阐明引起排卵和卵泡成熟的 GnRH 神经元周期性活动的机制

• 批准号: 20K06924
• 负责人: 渡部 美穂
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06924/
• 关键词: GnRHニューロン; GABA; 生殖; KCC2; 視床下部; オシレーション; クロライド; カルシウムオシレーション

多数のGnRHニューロン間で周期的に活動が同期することがGnRH分泌様式の基盤となる可能性を考え、活動の指標として自発的なカルシウム上昇を記録し、解析を進めている。栄養状態の低下により生殖機能が低下した時のGnRHニューロンの同期活動の変化を検討するために、食事制限ストレスの方法を確立した。マウスに60%食事制限(通常の60%量の餌を10日間与える)を負荷したところ、負荷2日後より体重が減少し、10日後には25%の体重減少が認められた。食事制限の負荷により、ストレス負荷時に活性化されるコルチコトロピン放出ホルモン(CRH)ニューロンでc-Fosの発現が認められ、血中コルチコステロンの上昇が認められた。空腹時に活性化されるアグーチ関連ペプチド(AgRP)ニューロンでもc-Fosの発現が認められたことから、食事制限ストレスの方法を確立できた。また、GnRHニューロンの同期活動の性周期や性成熟に伴う変化、ストレス負荷時の同期活動の変化を個体レベルで検討するために、マウス視床下部のin vivo Ca2+イメージングの方法の確立を共同研究者の協力で行った。GnRHニューロンでカルシウムセンサーであるGCaMPを発現するマウスの頭蓋骨に穴をあけ、Gradient refractive index(GRIN)レンズを埋め込み、デンタルセメントで固定し、GnRHニューロンの活動のin vivo Ca2+イメージングによる記録を進めている。GnRHニューロンでGCaMP6fを発現するマウスから視床下部スライス標本を作成し、活動の指標として自発的なカルシウムの上昇の記録を進めているが、GnRHニューロンでのGCaMPの発現が弱いため、マウスのホモ化やスライス標本の状態をより良くするために、スライス作成時にNMDG溶液を使用、インターフェースチャンバーを使用するなど検討を行っている。

Most の GnRH ニ ュ ー ロ ン に で cycle activities between the same period が す る こ と が GnRH secretion others type の base plate と な る possibility を え test, activity の と し て from 発 な カ ル シ ウ ム rise を record し, parse を into め て い る. Low tech students.their ownship to raise state の に よ り low reproductive function が し た when の GnRH ニ ュ ー ロ ン の activity の same variations change を beg す 検 る た め に limitations, food ス ト レ ス の way を establish し た. Limitations マ ウ ス に 60% food (usually の を 10 day bait and 60% の え る) を load し た と こ ろ, load 2 later よ が り weight reducing し, 10 days に は の 25% weight loss が recognize め ら れ た. Food system limit load に の よ り, ス ト レ ス load に activeness さ れ る コ ル チ コ ト ロ ピ ン release ホ ル モ ン (CRH) ニ ュ ー ロ ン で c - Fos の 発 が now recognize め ら れ, blood コ ル チ コ ス テ ロ ン の rise が recognize め ら れ た. On an empty stomach に activeness さ れ る ア グ ー チ masato even ペ プ チ ド (AgRP) ニ ュ ー ロ ン で も - c Fos の 発 が now recognize め ら れ た こ と か ら limitations, food ス ト レ ス の way を establish で き た. ま た, GnRH ニ ュ ー ロ ン の activity や sexual maturity に の sexual cycle with same う variations, ス ト レ ス load の activity の same individual variations change を レ ベ ル で す 検 please る た め に, マ ウ ス depending on the lower part of the bed の in vivo Ca2 + イ メ ー ジ ン グ の way の line established を researchers の together together で っ た. GnRH ニ ュ ー ロ ン で カ ル シ ウ ム セ ン サ ー で あ る GCaMP を 発 now す る マ ウ ス の skull に den を あ け, Gradient refractive index (GRIN) レ ン ズ を buried め 込 み, デ ン タ ル セ メ ン ト で fixed し, GnRH ニ ュ ー ロ ン の の activity in vivo Ca2+ メ メ ジ ジ グによる グによる is recorded を into めて る る る. GnRH ニ ュ ー ロ ン で GCaMP6f を 発 now す る マ ウ ス か ら depending on the lower part of the bed ス ラ イ ス specimen を の make し, activity index と し て from 発 な カ ル シ ウ ム の rise の record を into め て い る が, GnRH ニ ュ ー ロ ン で の GCaMP の 発 now が weak い た め, マ ウ ス の ホ モ change や ス ラ イ ス specimen の state を よ り く "good" す る た め に, ス ラ イ ス done when に を NMDG solution using, イ ン タ ー フ ェ ー ス チ ャ ン バ ー を use す る な ど 検 line for を っ て い る.

项目成果

Regulated KCC2 phosphorylation is critical for dynamic GABA-mediated inhibition.

调节 KCC2 磷酸化对于动态 GABA 介导的抑制至关重要。

• 发表时间: 2022
• 作者: Watanabe M;Kahle KT;Fukuda A
• 通讯作者: Fukuda A

タウリンの枯渇がマウス行動および発達期の体重に及ぼす影響

牛磺酸消耗对小鼠行为和发育体重的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: 渡部美穂;細井泰志;福田敦夫
• 通讯作者: 福田敦夫

抑制性神経伝達におけるカリウム-クロライド共輸送体(KCC2)のリン酸化による機能制御の役割.

氯化钾协同转运蛋白 (KCC2) 磷酸化在抑制性神经传递中的功能调节作用。

• 发表时间: 2022
• 作者: 渡部美穂;Kahle KT;福田 敦夫.
• 通讯作者: 福田 敦夫.

細胞内タウリンのプロテインキナーゼCによるリン酸化を介したGABAA受容体膜発現制御

蛋白激酶 C 磷酸化细胞内牛磺酸调节 GABAA 受体膜表达

• 发表时间: 2020
• 期刊: タウンリンサーチ
• 作者: 渡部美穂;細井泰志;秋田天平;伊藤崇志;福田敦夫
• 通讯作者: 福田敦夫

WNK3 kinase maintains neuronal excitability by regulating trafficking of KCC2 and inward rectifying K+ channels in layer V pyramidal neurons of mouse medial prefrontal cortex.

WNK3 激酶通过调节小鼠内侧前额叶皮层 V 层锥体神经元中 KCC2 的运输和向内整流 K 通道来维持神经元兴奋性。

• 发表时间: 2022
• 作者: Sinha AS;Wang T;Watanabe M;Sohara E;Akita T;Uchida S;Fukuda A.
• 通讯作者: Fukuda A.