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排卵や卵胞成熟を引き起こすGnRHニューロンの周期的活動のメカニズムの解明

阐明引起排卵和卵泡成熟的 GnRH 神经元周期性活动的机制

基本信息

批准号：
20K06924
负责人：
渡部美穂
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

多数のGnRHニューロン間で周期的に活動が同期することがGnRH分泌様式の基盤となる可能性を考え、活動の指標として自発的なカルシウム上昇を記録し、解析を進めている。栄養状態の低下により生殖機能が低下した時のGnRHニューロンの同期活動の変化を検討するために、食事制限ストレスの方法を確立した。マウスに60%食事制限(通常の60%量の餌を10日間与える)を負荷したところ、負荷2日後より体重が減少し、10日後には25%の体重減少が認められた。食事制限の負荷により、ストレス負荷時に活性化されるコルチコトロピン放出ホルモン(CRH)ニューロンでc-Fosの発現が認められ、血中コルチコステロンの上昇が認められた。空腹時に活性化されるアグーチ関連ペプチド(AgRP)ニューロンでもc-Fosの発現が認められたことから、食事制限ストレスの方法を確立できた。また、GnRHニューロンの同期活動の性周期や性成熟に伴う変化、ストレス負荷時の同期活動の変化を個体レベルで検討するために、マウス視床下部のin vivo Ca2+イメージングの方法の確立を共同研究者の協力で行った。GnRHニューロンでカルシウムセンサーであるGCaMPを発現するマウスの頭蓋骨に穴をあけ、Gradient refractive index(GRIN)レンズを埋め込み、デンタルセメントで固定し、GnRHニューロンの活動のin vivo Ca2+イメージングによる記録を進めている。GnRHニューロンでGCaMP6fを発現するマウスから視床下部スライス標本を作成し、活動の指標として自発的なカルシウムの上昇の記録を進めているが、GnRHニューロンでのGCaMPの発現が弱いため、マウスのホモ化やスライス標本の状態をより良くするために、スライス作成時にNMDG溶液を使用、インターフェースチャンバーを使用するなど検討を行っている。

The activity of GnRH in most periods is recorded and analyzed in the same period as that of GnRH secretions. To establish a method of regulating GnRH activity in response to low reproductive function and to control its activity. 60% food restriction (usually 60% of the amount of bait 10 days and 10 days), weight loss after 2 days of loading, weight loss after 10 days Food control load is activated when the load is applied, and the c-Fos is activated when the load is applied (CRH). The method for the generation of c-Fos in the fasting state was established. Co-investigators collaborated to establish a method for determining the sex cycle, sex maturation, and sex load of GnRH isochronous activity in vivo. GnRH may be detected by GCaMP, gradient refractive index(GRIN), or the like. GnRH may be detected by GCaMP, Gradient refractive index(GRIN), or the like. GnRH activity may be recorded in vivo Ca2+. GCaMP6f is generated, the activity index is generated, the record of the rise of GCaMP 6 f is generated, the GCaMP 6 f is generated, the NMDG solution is generated.