ボツリヌス菌の走化性はその病原性といかに関わるか

肉毒杆菌的趋化性与其致病性有何关系？

• 批准号: 20K07502
• 负责人: 西山 宗一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nigata University of Phermacy and Applied Life Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K07502/
• 关键词: 走化性; 偏性嫌気性菌; スポロゲネス菌; ボツリヌス菌; 走化性受容体; クロストリジウム属細菌

本研究ではべん毛をもち運動能を示す偏性嫌気性菌Clostridium属細菌の走化性能の解析を目的としている．今年度は以下の実験を行った．まずスウォームプレートを用いた走化性アッセイ系の最適化においては，平板作製に用いる寒天が滅菌時に酸化ストレス物質を生じるとする説があるため，代替としてゲランガムを支持体とするスウォームプレートを試みた．ゲランガムは透明度が高く，もしスウォームを観察できれば解析にも極めて有利である．ゲランガムは陽イオンにより固化するため，1価や2価の種々のカチオン塩を様々な濃度で試した．種々の条件検討の結果，理想的な硬度を備えたゲルの作製に成功したが，スポロゲネス菌はこのゲル中で不定形・放射線状の広がりを見せ，走化性の指標であるスウォームリングを形成しなかった．おそらくはゲルの内部構造が寒天のそれとは根本的に異なることが原因と考えられる．他方，既存の寒天ゲルを用いたスウォームプレートによる最適化も並行で行った．培地作製条件の改変によりオートクレーブ時に発生する酸化ストレス物質の低減に成功し，スポロゲネス菌の形成するスウォームリングの解像度が劇的に向上した．ゲノムからのアプローチ（大腸菌再構成系の確立）については，スポロゲネス菌の走性受容体ホモログのセンサードメインと大腸菌のシグナル産生ドメインとのキメラ受容体の構築を継続した．今年度は切替え部位を見直すことにより，スポロゲネス菌走化性応答経路の大腸菌内での再構成に初めて成功した．即ち新たに構築したキメラ受容体発現菌は発現が良好であり，発現菌は数種のアミノ酸に対して走化性応答を示した．そこで次にボツリヌス菌からゲノムDNAを取得し，同様にキメラ受容体を構築して解析を行った．こちらも良好な結果が得られ，ボツリヌス菌の特定の走化性受容体が数種のアミノ酸に対し誘引応答を媒介することを明らかにした．

The purpose of this study was to demonstrate the biochemical properties of Clostridium spp. This year, the following actions were taken. In order to optimize the system, the plate production process should be carried out in cold weather, and the production process of acidified substances should be carried out in cold weather. The transparency of the film is high, and it is easy to detect it. The concentration of the first and second species was determined. As a result of the investigation of the conditions, the ideal hardness is prepared for successful manufacture, and the hardness index is formed. The internal structure of the cold sky is different from that of the root. The other side, the existing cold weather, the use of the middle of the road, the optimization of the road. The improvement of the operating conditions of the culture medium was successful in reducing the production of acidified substances, and the improvement of the resolution of acidified substances was successful in increasing the production of bacteria. The construction of a bacterial receptor for Escherichia coli is an important part of the construction of a bacterial receptor for Escherichia coli. This year, the site of the cut was found to be directly related to the formation of the initial structure of the coliform in the bacterial pathway. That is to say, the new construction of the receptor development bacteria is very good, the development bacteria is several kinds of acid resistance to chemical reaction. The DNA was obtained and analyzed in the same way. The results are good, and the specific reactive receptors of the bacteria are several kinds of reactive agents.

项目成果

食品安全と食品防御

食品安全和食品防御

• DOI: 10.1271/kagakutoseibutsu.60.38
• 发表时间: 2022
• 期刊: KAGAKU TO SEIBUTSU
• 作者: Eizuka Makoto;Osakabe Mitsumasa;Sato Ayaka;Fujita Yasuko;Tanaka Yoshihito;Otsuka Koki;Sasaki Akira;Matsumoto Takayuki;Suzuki Hiromu;Sugai Tamotsu;西山宗一郎・浦上弘
• 通讯作者: 西山宗一郎・浦上弘

大腸菌再構成系を用いたClostridium属細菌走化性の解析

使用大肠杆菌重组系统分析梭菌趋化性

• 发表时间: 2022
• 作者: 小池 祥平;西山宗一郎
• 通讯作者: 西山宗一郎

Site-directed and random mutagenesis in Porphyromonas gingivalis: Construction of fimbriae-related-gene mutant

牙龈卟啉单胞菌的定点和随机诱变：菌毛相关基因突变体的构建

• DOI: 10.1007/978-1-0716-0939-2_1
• 发表时间: 2021
• 期刊: Methods in Molecular Biology
• 作者: Nishiyama S.; Hasegawa;Y.;and Nagano K.
• 通讯作者: and Nagano K.

Clostridium属細菌の走化性アッセイ法の確立

梭菌趋化性测定方法的建立

• 发表时间: 2020
• 作者: 西山 宗一郎;大越将;浦上弘
• 通讯作者: 浦上弘

大腸菌再構成系によるClostridium属細菌走化性受容体ホモログの機能解析

使用大肠杆菌重组系统对梭菌属细菌趋化性受体同源物进行功能分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 小池祥平;小林夏希;宮川結衣;西山宗一郎
• 通讯作者: 西山宗一郎