マクロファージ異常活性化経路の解析による多発筋炎/皮膚筋炎の新規治療標的分子同定

本研究の目的は、各種レポーター細胞株と、多発筋炎・皮膚筋炎患者保存血清を用いて、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING)経路がそこに関与していることを証明し、新規治療標的分子を同定することである。初年度～昨年度は、多発筋炎・皮膚筋炎患者血清を、 Interferon (IFN) regulatory　factorの活性化に応じて分泌性胎盤アルカリホスファターゼ（SEAP）を産生するTHP1-Blue ISG Cellsというヒト単球系のレポーター細胞株に添加すると、IFN誘導活性の上昇が生じること、抗MDA5抗体陽性筋炎患者と抗aminoacyl-tRNA synthetase (ARS)抗体陽性筋炎患者で反応が異なることを見いだした。また、IFN誘導活性の活性化に応じてルシフェラーゼを、TLRアゴニストによるNF-κB経路活性化に応じてSEAPを産生するTHP1-Dual Cellsというレポーター細胞株のcGASまたはSTINGをノックアウトしたレポーター細胞株において、ルシフェラーゼ分泌が低下することから、IFN誘導活性化へのcGAS-STING経路の関与も推定された。今年度（3年目）は、抗MDA5抗体陽性筋炎患者においてI型IFN経路が活性化していることをレポーター細胞以外の方法で示すために、筋生検で得られた切片の免疫染色を行った。ウイルス由来RNAを認識してI型IFN経路を活性化するRetinoic acid-inducible gene I (RIG-I)とI型IFN経路が活性化されると細胞内に誘導されるMxA (myxovirus resistance A)について、蛍光抗体および共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、これらの分子の筋細胞における発現が認められた。

本研究の目的は、各種レポーター細胞株と、多発筋炎・皮膚筋炎患者保存血清を用いて、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING)経路がそこに関与していることを証明し、新規治療標的分子を同定することである。初年度～昨年度は、多発筋炎・皮膚筋炎患者血清を、 Interferon (IFN) regulatory　factorの活性化に応じて分泌性胎盤アルカリホスファターゼ（SEAP）を産生するTHP1-Blue ISG Cellsというヒト単球系のレポーター細胞株に添加すると、IFN誘導活性の上昇が生じること、抗MDA5抗体陽性筋炎患者と抗aminoacyl-tRNA synthetase (ARS)抗体陽性筋炎患者で反応が異なることを見いだした。また、IFN誘導活性の活性化に応じてルシフェラーゼを、TLRアゴニストによるNF-κB経路活性化に応じてSEAPを産生するTHP1-Dual Cellsというレポーター細胞株のcGASまたはSTINGをノックアウトしたレポーター細胞株において、ルシフェラーゼ分泌が低下することから、IFN誘導活性化へのcGAS-STING経路の関与も推定された。今年度（3年目）は、抗MDA5抗体陽性筋炎患者においてI型IFN経路が活性化していることをレポーター細胞以外の方法で示すために、筋生検で得られた切片の免疫染色を行った。ウイルス由来RNAを認識してI型IFN経路を活性化するRetinoic acid-inducible gene I (RIG-I)とI型IFN経路が活性化されると細胞内に誘導されるMxA (myxovirus resistance A)について、蛍光抗体および共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、これらの分子の筋細胞における発現が認められた。