マクロファージ異常活性化経路の解析による多発筋炎/皮膚筋炎の新規治療標的分子同定

通过异常巨噬细胞激活途径分析鉴定多发性肌炎/皮肌炎新的治疗靶分子

• 批准号: 20K08810
• 负责人: 勝又 康弘
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08810/
• 关键词: 内科; 膠原病; 免疫学

本研究の目的は、各種レポーター細胞株と、多発筋炎・皮膚筋炎患者保存血清を用いて、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING)経路がそこに関与していることを証明し、新規治療標的分子を同定することである。初年度～昨年度は、多発筋炎・皮膚筋炎患者血清を、 Interferon (IFN) regulatory　factorの活性化に応じて分泌性胎盤アルカリホスファターゼ（SEAP）を産生するTHP1-Blue ISG Cellsというヒト単球系のレポーター細胞株に添加すると、IFN誘導活性の上昇が生じること、抗MDA5抗体陽性筋炎患者と抗aminoacyl-tRNA synthetase (ARS)抗体陽性筋炎患者で反応が異なることを見いだした。また、IFN誘導活性の活性化に応じてルシフェラーゼを、TLRアゴニストによるNF-κB経路活性化に応じてSEAPを産生するTHP1-Dual Cellsというレポーター細胞株のcGASまたはSTINGをノックアウトしたレポーター細胞株において、ルシフェラーゼ分泌が低下することから、IFN誘導活性化へのcGAS-STING経路の関与も推定された。今年度（3年目）は、抗MDA5抗体陽性筋炎患者においてI型IFN経路が活性化していることをレポーター細胞以外の方法で示すために、筋生検で得られた切片の免疫染色を行った。ウイルス由来RNAを認識してI型IFN経路を活性化するRetinoic acid-inducible gene I (RIG-I)とI型IFN経路が活性化されると細胞内に誘導されるMxA (myxovirus resistance A)について、蛍光抗体および共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、これらの分子の筋細胞における発現が認められた。

这项研究的目的是证明循环GMP-AMP合酶（CGAS） - 干扰素基因（STING）途径的刺激剂，并使用各种记者细胞系和血清鉴定新的治疗靶标分子，并在多层炎和性皮膜炎患者中存储的血清。 From the first year to last year, we found that serum of polymyositis/dermatomyositis patients was added to a human monocyte reporter cell line called THP1-Blue ISG Cells, which produces secretory placental alkaline phosphatase (SEAP) in response to the activation of the Interferon (IFN) regulatory factor, resulting in an increase in IFN-inducing activity, and that patients with anti-MDA5抗体阳性肌炎和抗氨基酰基-TRNA合成酶（ARS）抗体阳性肌炎不同。此外，在报告基细胞系中降低了荧光素酶的分泌，该细胞系中的CGA或刺痛称为Thp1偶有细胞的报道细胞系，该细胞系响应于激活IFN诱导活性和SEAP的激活，从而产生荧光素酶，以响应于TLR的激活以及CGAS-STNED的cgas-strove infnection in Ifn infnection inf-κB途径激活NF-κB途径。今年（第三年），进行了通过肌肉活检获得的切片的免疫染色，以证明使用报告细胞以外的其他方法，在患有抗MDA5抗体阳性肌炎的患者中激活了I型IFN途径。视黄酸诱导的基因I（RIG-I）识别病毒衍生的RNA并激活I型IFN途径，而MXA（粘液病毒抗性A）在激活I型IFN途径时会在细胞内诱导，并用荧光抗体和共聚糖激光显微镜和这些分子的表达观察到IFN途径。