マクロファージ異常活性化経路の解析による多発筋炎/皮膚筋炎の新規治療標的分子同定

通过异常巨噬细胞激活途径分析鉴定多发性肌炎/皮肌炎新的治疗靶分子

• 批准号: 20K08810
• 负责人: 勝又 康弘
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K08810/
• 关键词: 内科; 膠原病; 免疫学

本研究の目的は、各種レポーター細胞株と、多発筋炎・皮膚筋炎患者保存血清を用いて、cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING)経路がそこに関与していることを証明し、新規治療標的分子を同定することである。初年度～昨年度は、多発筋炎・皮膚筋炎患者血清を、 Interferon (IFN) regulatory　factorの活性化に応じて分泌性胎盤アルカリホスファターゼ（SEAP）を産生するTHP1-Blue ISG Cellsというヒト単球系のレポーター細胞株に添加すると、IFN誘導活性の上昇が生じること、抗MDA5抗体陽性筋炎患者と抗aminoacyl-tRNA synthetase (ARS)抗体陽性筋炎患者で反応が異なることを見いだした。また、IFN誘導活性の活性化に応じてルシフェラーゼを、TLRアゴニストによるNF-κB経路活性化に応じてSEAPを産生するTHP1-Dual Cellsというレポーター細胞株のcGASまたはSTINGをノックアウトしたレポーター細胞株において、ルシフェラーゼ分泌が低下することから、IFN誘導活性化へのcGAS-STING経路の関与も推定された。今年度（3年目）は、抗MDA5抗体陽性筋炎患者においてI型IFN経路が活性化していることをレポーター細胞以外の方法で示すために、筋生検で得られた切片の免疫染色を行った。ウイルス由来RNAを認識してI型IFN経路を活性化するRetinoic acid-inducible gene I (RIG-I)とI型IFN経路が活性化されると細胞内に誘導されるMxA (myxovirus resistance A)について、蛍光抗体および共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ、これらの分子の筋細胞における発現が認められた。

The purpose of this study is to demonstrate the relationship between the cyclic GMP-AMP synthase (cGAS)-stimulator of interferon genes (STING) pathway and the identification of new therapeutic target molecules. From the beginning of the year to the end of the year, the serum of patients with polymyositis and dermatitis, the activation of Interferon (IFN) regulatory factor, the production of secretory placenta extract (SEAP), the addition of THP1-Blue ISG Cells, and the increase of IFN-induced activity were detected. Anti-MDA 5 antibody positive patients with myositis and anti-aminoacyl-tRNA synthase (ARS) antibody positive patients with myositis cGAS in THP1-Dual Cells and cGAS-STING in Cell Lines with Low Secretion of cGAS-STING in THP1-Dual Cells and Thp1-Dual Cells with Low Secretion of cGAS-STING in THP1-Dual Cells and Thp1-Dual Cells with Low Secretion of cGAS-STING in THP1-Dual Cells This year (3 years), anti-MDA 5 antibody positive patients with inflammation, IFN type I pathway activation, and other methods to show that, tendon production, and sections of immunostaining It is recognized by RNA activation, Retinoic acid-inducible gene I (RIG-I) activation, intracellular induction, MxA (myxovirus resistance A) detection, fluorescent antibody and confocal microscopy.