尿路結石マトリックス蛋白オステオポンチンを標的としたマクロファージ貪食機序の解明

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[1] 培養Mφ・iPS細胞由来Mφによる結晶貪食モデルの確立① 培養Mφを用いたM1/M2誘導による貪食解析：完了している。② 既存薬ライブラリーによる貪食能の亢進薬の選出：既存薬ライブラリーFDA-approved Drug Library (384-well)-L1300の約800種類の薬剤に関し貪食解析を完了した。現在追加で800種類の解析を行っている。一次スクリーニングn=3、二次スクリーニングn=10で行い、薬剤と結晶のみでの単独実験で直接作用を持つものを除外した。現在追加800種類の2次スクリーニングが終了しつつある。[2] OPN欠損マウスを用いたマクロファージ分布解析・貪食解析③ OPN添加f-COM結晶のMφ貪食試験：[1]①研究が完了していないため、着手していない。④ OPN欠損マウスの腎結晶・Mφを用いた貪食解析：OPNノックアウトマウスと野生型マウスから骨髄Mφ(Bone marrow-derived macrophage; BMDM)を採取し、COM結晶を暴露した。OPN-/-BMDMはOPNが有意に抑制されていたが、COM結晶の接着率は、OPN-/-型がOPN+/+型よりも有意に多かった。OPN-/-BMDMのIntgavとIntgb3の発現は、OPN+/+と比較してそれぞれ0.80倍(p=0.41), 1.61倍(p<1.61)であった。[3] ヒトiPS細胞由来Mφを用いた腎結石貪食解析⑤ ヒトiPS細胞由来MφのM1/M2への分化誘導とf-COM結晶貪食解析：結石患者・健常者由来iPS細胞MφからM1/M2に分化させることに成功した。また[1]の手法を用いてf-COM結晶を貪食することを確認できた。⑥ ヒトiPS細胞由来Mφの腎結石の貪食解析と貪食促進薬の効果判定：②の薬剤スクリーニング中であり、開始できていない。