婦人科がんにおけるテロメラーゼ、サバイビンを標的とした血中循環腫瘍細胞の検出

通过靶向妇科癌症中的端粒酶和生存素来检测血液中的循环肿瘤细胞

• 批准号: 20K18178
• 负责人: 高田 笑
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kanazawa Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18178/
• 关键词: 末梢血中腫瘍細胞; テロメラーゼ; サバイビン; 抹消循環がん細胞; 血中循環腫瘍細胞; 婦人科がん; 末梢血中循環腫瘍細胞; 婦人科癌

がんはその進行・進展過程において遺伝学的にも生物学的にも大きくその姿を変容させる。末梢血中腫瘍細胞（circulating tumor cells; CTCs ）はその変化を捉え、治療に反映させるためのバイオマーカーとして、また非侵襲的にがん細胞を得ることができるリキッドバイオプシーの手法として有望視されている。しかしながらその検出法や解析法は未だに確立されていない。現在、主流である細胞表面抗原に主に頼った検出方法ではその微小環境や遺伝子変異の蓄積などによって様々に姿を変える癌細胞を捉えきれていない可能性がある。本研究ではがん細胞の根源的性質である不死化能を司るテロメラーゼおよびアポトーシス抵抗性に重要なサバイビンの活性化を標的としてCTCsを検出する系を改良し、より簡便かつ安価な手法として標準化を図ると同時に、婦人科がんにおけるその臨床的意義を明らかにすることを目標としている。hTERT(テロメラーゼの酵素活性中心蛋白)プロモーターおよびサバイビンプロモーター下流に細胞膜貫通ドメインとタグタンパクの融合タンパクを発現するベクターを作成した。これらのベクターの細胞導入後にタグタンパクに対する蛍光リガンドを用いてCTCsを標識、検出した。正常血液に培養癌細胞を一定数混入させたCTCモデル検体を用いて行ったCTCs検出実験では検出感度は約90％であった。本年度、このモデル実験の結果を踏まえて臨床検体による検討を予定したが、コロナ禍の影響のため外来での検体収集は次年度の課題とした。

癌症在进展和发育过程中可以极大地改变其外观，无论是遗传和生物学上的外观。外周血肿瘤细胞（CTC）被认为是有望作为生物标志物捕获和反映治疗中这些变化的生物标志物，并作为允许无创癌细胞侵入性的液体活检技术。但是，尚未建立检测和分析方法。当前，主要依赖于主流的细胞表面抗原的检测方法可能无法捕获由于微环境和基因突变的积累而导致外观变化的癌细胞。这项研究旨在改善检测靶向端粒酶激活的CTC的系统，该系统控制癌细胞的不朽能力，而Survivin对于抗细胞凋亡的耐药性很重要，可以将其标准化为一种简单且不表现力的方法，同时还阐明了其在妇科癌症中的临床意义。创建了一个载体，该载体在HTERT（端粒酶的酶活性中心蛋白）启动子和Survivin启动子的下游的跨膜结构域和TAG蛋白之间表达融合蛋白。在引入这些载体后，使用荧光配体标记CTC并检测到TAG蛋白。在使用CTC模型样品进行的CTC检测实验中，将一定数量的培养癌细胞混合到正常血液中，检测敏感性约为90％。今年，我们计划根据该模型实验的结果来考虑临床标本，但是由于COVID-19大流行的影响，门诊标本收集是明年的一项任务。