新規アミロイドβペプチド制御因子GAL3BPによるアルツハイマー病治療法の開発

使用新型淀粉样β肽调节剂GAL3BP开发阿尔茨海默病治疗方法

基本信息

批准号：
20K22874
负责人：
関恒慶
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-09-11 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

現在、GAL3BP発現トランスジェニックマウスを作出でき、さらに、アルツハイマー病モデルマウスAPPNL-G-F/NL-G-Fマウス（Saito et al, Nature Neurosci 2014：理研BRCより購入）と掛け合わせている。得られた二重変異マウスの脳内でのAβ産出量（ELISA法）、脳標本でのAβ沈着量（免疫染色法）を指標に、GAL3BPのAβ産出抑制活性をin vivo で評価する。神経病理は、神経炎症とシナプス変性を指標に、また、認知機能については、学習・記憶、社会行動に関するマウス行動解析試験（バーンズ迷路、T字型迷路）を実施し評価する。これらにより、GAL3BPのAβ産出抑制効果とアルツハイマー病の進行抑制効果が個体レベルで明らかになり、GAL3BP療法のProof-of-Conceptを示す。また、GAL3BPを分割した小ユニットペプチドの作成ができ、今後、それらのAPP結合活性とAβ産出抑制活性を、APP発現培養細胞を用いた免疫沈降法とELISA法で検証する。得られた最小ユニットをペプチド合成し、アルツハイマー病モデルマウスへ投与し（経静脈、経髄液、経腹腔）、Aβ産出量、神経病理、認知機能を評価している。ペプチドの脳内移行および体内動態は、蛍光標識ペプチドを用いて評価する。機能性ペプチドで効果が得られない場合は、全長の組換えGAL3BPの投与を検討する。本計画により、GAL3BPの機能ユニットを用いたペプチド創薬の基盤的知見が得られる。ADの治療標的となることを、ADモデルマウスを用いて実証し、GAL3BPのAβ抑制の最小機能ペプチドを同定することで、ペプチド創薬にむけた基盤的知見を得る。

目前，可以产生表达GAL3BP的转基因小鼠，并且还与阿尔茨海默氏病小鼠模型AppNL-G-F/NL-G-F小鼠互换（购自Saito等人，Nature Neurosci 2014：Riken BRC）。使用大脑中获得的Aβ产生量（ELISA方法）在体内评估GAL3BP的Aβ产生抑制活性，而双突变小鼠大脑中的Aβ沉积量（免疫染色方法）作为指标。使用神经炎症和突触变性作为指标评估神经病理学，并进行了认知功能，并进行了小鼠行为分析测试（Barnes Maze，T形迷宫），用于学习，记忆和社会行为。这些结果揭示了GAL3BP抑制Aβ产生的作用以及在个体水平上抑制阿尔茨海默氏病进展的作用，表明GAL3BP治疗的概念证明。此外，可以生产具有GAL3BP的小单位肽，并且将来，将使用免疫沉淀和ELISA方法使用表达App的培养细胞来验证其应用程序结合活性和Aβ产生抑制活性。评估了所获得的最小单位并给予阿尔茨海默氏病模型小鼠（静脉内，跨共同液，经腹膜）和Aβ产生，神经病理学和认知功能。使用荧光标记的肽评估肽的脑转移和体细胞动力学。如果功能性肽不提供效果，请考虑给予全长重组GAL3BP。该项目将使用GAL3BP的功能单位提供对肽药物发现的基本知识。通过证明使用AD模型小鼠的AD的治疗靶标，并鉴定Aβ抑制GAL3BP的最小功能性肽，我们获得了肽药物发现的基本知识。