Monitoring of plasmid behaviors in phytosphere in different climate zones

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植物の葉圏・根圏（植物体圏）が，プラスミドや薬剤耐性遺伝子の温床となっていることが示されている．昨年度，施肥条件が異なり，複数種類の作物を輪作している筑波大学の管理圃場の植物体圏からプラスミドキャプチャリングを実施し，IncP群とPromA群プラスミドを取得した．これらのプラスミドの存在量の変化を，PCR-サザンブロット法によって追跡し，IncP群は検出できたのに対し，PromA群プラスミドは検出限界以下であった．また各プラスミドの完全長塩基配列に基づく詳細な解析の結果，水銀耐性遺伝子群を含む複数のIncP群プラスミドや，新規IncP群（既存のIncP群プラスミドと不和合性を示すものの，各遺伝子の塩基配列の相同性が低く，新たな亜群に属する）プラスミド，発見数の限られたPromA群プラスミドが含まれることが判明した．本年度はこれに加えて，一部の対面交流ができるようになったため，ドイツ側との打ち合わせを経て，プラスミドの動態における共同研究の一環として，相手国側の研究者と，学会での共同発表を行った．また，気候帯の異なる土壌試料からのキャプチャリングとして，エジプトの根圏由来のプラスミドについて，塩基配列の解読の準備を進めた．さらに，植物体圏でのプラスミドの動態を追跡する実験については，プラスミド伝播を追跡するための材料として，GFPを発現する遺伝子を挿入したIncP群（種々の薬剤耐性遺伝子を伝播し，重要な亜群であると判明したイプシロン亜群）を作製し，ドイツ側での実験ができるようにした．