Exploring of the pathogenesis of intractable eosinophilic airway inflammation via eosinophilic exosome-derived miRNA

通过嗜酸性外泌体衍生的 miRNA 探索难治性嗜酸性气道炎症的发病机制

• 批准号: 22K07457
• 负责人: 小林 良樹
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07457/
• 关键词: 好酸球性エクソソーム; micro RNA

本年度は、活性化好酸球から放出されるエクソソーム由来のmicro RNA (miRNA)の抽出および網羅的遺伝子解析を行なった。ヒト気道上皮細胞株であるBEAS-2B細胞と末梢血分離好酸球の共培養を用いた系で検証した。健常人と難治性好酸球性気道疾患症例（喘息を合併している好酸球性副鼻腔炎）の末梢血から分離した好酸球をBEAS-2B細胞と共培養し、回収した培養上清に含まれるエクソソームの単離を専用のキットを用いて行なった。続いて、単離したエクソソームからRNA抽出を行い、エクソソーム内のmiRNAを次世代シーケンスを活用したsmall RNAシーケンスにて網羅的に同定・比較解析した。その結果、疾患群において有意に増加していたものの中で炎症に関与することで知られているmiRNA-432-5pが好酸球性気道炎症に関与する遺伝子の候補にあがった。miRNAはタンパク質を作りださない短鎖（20-25塩基）のRNA（ノンコーディングRNA）で、自身と同じ配列をもつ遺伝子のメッセンジャーRNA（mRNA）に結合し、そのmRNAを分解したりタンパク質への翻訳を阻害したりすることでその遺伝子の発現を抑制する。そこで、miRNA-432-5pのターゲットとなる遺伝子をBioinfomaticsを活用して抽出した。具体的には、TargetScan、TarBase、miRDB、miRWalkなどのサイトを利用していくつかの遺伝子を選定した。また、疾患群の活性化好酸球ではmiRNA-432-5pの発現が増加していること、疾患群の活性化好酸球と共培養したBEAS-2BでもmiRNA-432-5pの発現が増加していることがわかり、エクソソームを介したmiRNAの伝播の可能性が示唆された。

This year, the activated acid ball was released and the origin of micro RNA (miRNA) was extracted and analyzed. The BEAS-2B cells of the human epithelial cell line and peripheral blood-separated acid spheres were co-cultured and used in the laboratory. Examples of refractory aphthous tract disease in healthy people (wheezing combined with aphthous pararhinitis) and separation of peripheral blood and aphthous tract disease B EAS-2B cells were co-cultured and the culture supernatant was recovered and the culture supernatant was collected.続いて、単利したエクソソームからRNA extracted を行い、エクソソーム内のmiRNAをNext generation シーケンスをutilizationしたsmall The same determination and comparative analysis of RNA's collection.そのRESULTS, DISEASE CLUSTERS において intentional に Increase していたものの中でinflammatory に关与することで知られているmiRNA-432-5p is a good candidate for acid globus tract inflammation and is a candidate for する缝子. RN of the short lock of miRNAはタンパク性を为りださない (20-25 塩base) A（ノンコーディングRNA）で、 myself and the same arrangementをもつ伝子のメッThe combination of RNA (mRNA) and the decomposition of mRNAしたりすることでその缝子の発appears to suppress the する.そこで、miRNA-432-5pのターゲットとなる伝子をBioinfomaticsをutilize the して extracted した. Specifically, には, TargetScan, TarBase, miRDB, and miRWalkなどのサイトを are selected using していくつかの伝子を.また、Activated good acid ball of the disease group ではmiRNA-432-5pの発成がincreaseしていること、Activated good acid ball of the disease group とCo-cultivation したBEAS- 2BでもmiRNA-432-5pの発成が Increase and addしていることがわかり、エクソソームを Introduction したmiRNAの伝 Broadcasting のpossibility がshows instigation された.