Exploring of the pathogenesis of intractable eosinophilic airway inflammation via eosinophilic exosome-derived miRNA

本年度は、活性化好酸球から放出されるエクソソーム由来のmicro RNA (miRNA)の抽出および網羅的遺伝子解析を行なった。ヒト気道上皮細胞株であるBEAS-2B細胞と末梢血分離好酸球の共培養を用いた系で検証した。健常人と難治性好酸球性気道疾患症例（喘息を合併している好酸球性副鼻腔炎）の末梢血から分離した好酸球をBEAS-2B細胞と共培養し、回収した培養上清に含まれるエクソソームの単離を専用のキットを用いて行なった。続いて、単離したエクソソームからRNA抽出を行い、エクソソーム内のmiRNAを次世代シーケンスを活用したsmall RNAシーケンスにて網羅的に同定・比較解析した。その結果、疾患群において有意に増加していたものの中で炎症に関与することで知られているmiRNA-432-5pが好酸球性気道炎症に関与する遺伝子の候補にあがった。miRNAはタンパク質を作りださない短鎖（20-25塩基）のRNA（ノンコーディングRNA）で、自身と同じ配列をもつ遺伝子のメッセンジャーRNA（mRNA）に結合し、そのmRNAを分解したりタンパク質への翻訳を阻害したりすることでその遺伝子の発現を抑制する。そこで、miRNA-432-5pのターゲットとなる遺伝子をBioinfomaticsを活用して抽出した。具体的には、TargetScan、TarBase、miRDB、miRWalkなどのサイトを利用していくつかの遺伝子を選定した。また、疾患群の活性化好酸球ではmiRNA-432-5pの発現が増加していること、疾患群の活性化好酸球と共培養したBEAS-2BでもmiRNA-432-5pの発現が増加していることがわかり、エクソソームを介したmiRNAの伝播の可能性が示唆された。

本年度は、活性化好酸球から放出されるエクソソーム由来のmicro RNA (miRNA)の抽出および網羅的遺伝子解析を行なった。ヒト気道上皮細胞株であるBEAS-2B細胞と末梢血分離好酸球の共培養を用いた系で検証した。健常人と難治性好酸球性気道疾患症例（喘息を合併している好酸球性副鼻腔炎）の末梢血から分離した好酸球をBEAS-2B細胞と共培養し、回収した培養上清に含まれるエクソソームの単離を専用のキットを用いて行なった。続いて、単離したエクソソームからRNA抽出を行い、エクソソーム内のmiRNAを次世代シーケンスを活用したsmall RNAシーケンスにて網羅的に同定・比較解析した。その結果、疾患群において有意に増加していたものの中で炎症に関与することで知られているmiRNA-432-5pが好酸球性気道炎症に関与する遺伝子の候補にあがった。miRNAはタンパク質を作りださない短鎖（20-25塩基）のRNA（ノンコーディングRNA）で、自身と同じ配列をもつ遺伝子のメッセンジャーRNA（mRNA）に結合し、そのmRNAを分解したりタンパク質への翻訳を阻害したりすることでその遺伝子の発現を抑制する。そこで、miRNA-432-5pのターゲットとなる遺伝子をBioinfomaticsを活用して抽出した。具体的には、TargetScan、TarBase、miRDB、miRWalkなどのサイトを利用していくつかの遺伝子を選定した。また、疾患群の活性化好酸球ではmiRNA-432-5pの発現が増加していること、疾患群の活性化好酸球と共培養したBEAS-2BでもmiRNA-432-5pの発現が増加していることがわかり、エクソソームを介したmiRNAの伝播の可能性が示唆された。