Exploring of the pathogenesis of intractable eosinophilic airway inflammation via eosinophilic exosome-derived miRNA

通过嗜酸性外泌体衍生的 miRNA 探索难治性嗜酸性气道炎症的发病机制

• 批准号: 22K07457
• 负责人: 小林 良樹
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07457/
• 关键词: 好酸球性エクソソーム; micro RNA

本年度は、活性化好酸球から放出されるエクソソーム由来のmicro RNA (miRNA)の抽出および網羅的遺伝子解析を行なった。ヒト気道上皮細胞株であるBEAS-2B細胞と末梢血分離好酸球の共培養を用いた系で検証した。健常人と難治性好酸球性気道疾患症例（喘息を合併している好酸球性副鼻腔炎）の末梢血から分離した好酸球をBEAS-2B細胞と共培養し、回収した培養上清に含まれるエクソソームの単離を専用のキットを用いて行なった。続いて、単離したエクソソームからRNA抽出を行い、エクソソーム内のmiRNAを次世代シーケンスを活用したsmall RNAシーケンスにて網羅的に同定・比較解析した。その結果、疾患群において有意に増加していたものの中で炎症に関与することで知られているmiRNA-432-5pが好酸球性気道炎症に関与する遺伝子の候補にあがった。miRNAはタンパク質を作りださない短鎖（20-25塩基）のRNA（ノンコーディングRNA）で、自身と同じ配列をもつ遺伝子のメッセンジャーRNA（mRNA）に結合し、そのmRNAを分解したりタンパク質への翻訳を阻害したりすることでその遺伝子の発現を抑制する。そこで、miRNA-432-5pのターゲットとなる遺伝子をBioinfomaticsを活用して抽出した。具体的には、TargetScan、TarBase、miRDB、miRWalkなどのサイトを利用していくつかの遺伝子を選定した。また、疾患群の活性化好酸球ではmiRNA-432-5pの発現が増加していること、疾患群の活性化好酸球と共培養したBEAS-2BでもmiRNA-432-5pの発現が増加していることがわかり、エクソソームを介したmiRNAの伝播の可能性が示唆された。

This year, we will analyze the microRNA (miRNA) extracted from the active microspheres and the gene of the target. The co-culture of BEAS-2B cells and peripheral blood lymphocytes was performed in vitro. In healthy people, the peripheral blood of refractory eosinophilic airway disease (wheezing and eosinophilic paranasal sinusitis) was isolated and the eosinophilic BEAS-2B cells were co-cultured and returned to the culture supernatant. In the middle of the day, the small RNA gene was extracted from the genome, and the miRNA gene was used in the next generation. MiRNA-432- 5p is a candidate for oncogenic inflammation, which is associated with intentional increase in the number of results and disease groups. miRNA is a short chain (20-25 base) RNA that binds to the miRNA molecule, and its own sequence and sequence inhibit the expression of the miRNA molecule. MiRNA-432-5 is a novel gene that can be used in the production of bioinformatics. Specific target, TargetScan, TarBase, miRDB, miRWalk, etc. The expression of miRNA-432 - 5p increased in co-culture of activated allospheres of disease groups with BEAS-2B.