自閉症スペクトラム障害におけるExosome-miRNAの変化、及び病的意義

自闭症谱系障碍中外泌体-miRNA的变化及病理意义

• 批准号: 22K07562
• 负责人: 吉野 祐太
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07562/
• 关键词: エクソソーム; 自閉症スペクトラム障害; マイクロRNA; 自閉スペクトラム症; 脳血液関門

L1CAM抗体を用いた免疫沈降法により神経由来のエクソソームを抽出し、健常対照群と比較して自閉症スペクトラム障害（ASD）群においてmiR-20a-5pが有意に1.16倍上昇していることを確認した（P=0.003）。In silico解析により、miR-20a-5pがAPP, ATG7遺伝子発現を調節している可能性が示唆されたため、In vitro実験として、miR-20a-5pをBV2 cell lineで過剰発現させた結果、App (52%, p<0.001), Atg7 (83%, p<0.001)が有意に発現低下していることを確認した。現在、miR-20a-5pがこれらの遺伝子のseed sequenceに配列特異的に結合して発現低下を引き起こしているかを解明するために、Dual-Luciferase assayを用いた解析を進めている。Nano-Luciferase CD-81-BV2 cell lineから抽出したエクソソームをマウス尾静脈に投与した後に、脳組織におけるNano-lucifesaseを測定したが、RLUが低値であったため測定は困難だったため、この系での証明は困難であると判断した。神経由来のエクソソーム内でmiR-20a-5pがASD患者で上昇していることより、このmiRNAが脳内へ与える影響を調べるために、pAAV vectorを用いてマウス脳内にmiR-20a-5pを過剰発現させることを進めている。既にprecursor-miR-20a-5pをクローニングしたプラスミドを作成済であり、今後マウス脳内へ投与し、行動解析、および分子細胞学的な解析を進める予定である。

L1CAM antibody was detected by immunoprecipitation assay, and compared with normal control group, miR-20a-5p in autism spectrum disorder (ASD) group increased by 1.16 fold intentionally (P=0.003). In silico analysis, miR-20a-5p and APP, ATG7 gene expression was regulated, In vitro, miR-20a-5p and BV2 cell line, App (52%, p<0.001), Atg7 (83%, p<0.001) were intentionally lower. Now, miR-20a-5p has been used to analyze the seed sequence of this gene in a way that is specific to the sequence, and the dual-Luciferase assay has been used to analyze it. Nano-Luciferase CD-81-BV2 cell line was extracted from the tail vein, and nano-Luciferase was detected in the tissue. RLU was low. MiRs-20a-5p are elevated in ASD patients due to neurogenesis, miRNA and miRNA effects, and pAAV vectors are used to detect miRs-20a-5p in ASD patients. The precursor-miR-20a-5p is a new type of molecular cytology.