自閉症スペクトラム障害におけるExosome-miRNAの変化、及び病的意義

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L1CAM抗体を用いた免疫沈降法により神経由来のエクソソームを抽出し、健常対照群と比較して自閉症スペクトラム障害（ASD）群においてmiR-20a-5pが有意に1.16倍上昇していることを確認した（P=0.003）。In silico解析により、miR-20a-5pがAPP, ATG7遺伝子発現を調節している可能性が示唆されたため、In vitro実験として、miR-20a-5pをBV2 cell lineで過剰発現させた結果、App (52%, p<0.001), Atg7 (83%, p<0.001)が有意に発現低下していることを確認した。現在、miR-20a-5pがこれらの遺伝子のseed sequenceに配列特異的に結合して発現低下を引き起こしているかを解明するために、Dual-Luciferase assayを用いた解析を進めている。Nano-Luciferase CD-81-BV2 cell lineから抽出したエクソソームをマウス尾静脈に投与した後に、脳組織におけるNano-lucifesaseを測定したが、RLUが低値であったため測定は困難だったため、この系での証明は困難であると判断した。神経由来のエクソソーム内でmiR-20a-5pがASD患者で上昇していることより、このmiRNAが脳内へ与える影響を調べるために、pAAV vectorを用いてマウス脳内にmiR-20a-5pを過剰発現させることを進めている。既にprecursor-miR-20a-5pをクローニングしたプラスミドを作成済であり、今後マウス脳内へ投与し、行動解析、および分子細胞学的な解析を進める予定である。