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Development of innovative T cell-inducing vaccine drug based on mRNA delivery

开发基于 mRNA 递送的创新 T 细胞诱导疫苗药物

基本信息

批准号：
21H03818
负责人：
川上茂
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス筋肉内投与後、筋肉組織で高い発現を維持し、通常のmessenger RNA(mRNA)/lipid Nanoparticle (LNP)投与では高い発現を示す肝臓においては発現を低下することができる、局所特異的発現型の新規mRNA/LNPの開発についてLNPの脂質組成におけるコレステロール含量の最適化の解析により成功した。また、安定したmRNA/LNP実験を遂行するための保存条件がmRNA/LNPの物理化学的性質および発現能に及ぼす影響を明らかにした。さらに、モノクローナル抗体の特定領域と結合することができるペプチドXを用いた新規ペプチドX修飾脂質誘導体を合成し、本物質を用いた配向性を制御できる新規モノクローナル抗体修飾mRNA/LNPの開発を行い、in vitro実験によりモノクローナル抗体の細胞認識特性を通じて細胞に結合できる新規モノクローナル抗体修飾mRNA/LNPの開発に成功した。一方、昨年度開発に成功した新規膜透過性ペプチド修飾脂質であるKK-(EK)4脂質で修飾したKK-(EK)4脂質修飾mRNA/LNPのマイクロ流体法を利用した迅速後修飾法によるKKペプチド修飾に成功した。KK(EK)4修飾ｍRNA/LNPでは、未修飾mRNA/LNPに比べ、樹状細胞（Dendritic cells: DC）株であるDC2.4細胞において、100倍高い発現を示し、デザイナーDCの開発において有益なバイオマテリアルになることが示された。また、Ovalbumin(OVA) mRNAを作成し、mRNA/LNPをマウス筋肉内投与後の血清中抗OVA抗体産生に関する評価系の構築を行い、ワクチン効果を評価するための実験系の準備が整った。

The high level of mRNA/lipid Nanoparticle (LNP) expression in muscle tissue was maintained after administration, and the high level of mRNA/lipid Nanoparticle (LNP) expression in liver tissue was shown to be low. The preservation conditions of mRNA/LNP and its stability are discussed. In addition, the development of antibody-modified mRNA/LNP was successfully achieved in vitro, in which the specific domain and binding of antibodies were controlled. A new method for membrane permeability modification was successfully developed yesterday using a rapid post-modification method for KK-(EK) 4 lipid modification. KK(EK)4-modified mRNA/LNP was found in DC2.4 cells, 100-fold higher than unmodified mRNA/LNP and in dendritic cells (DC). The expression of Ovalbumin(OVA) mRNA was detected by PCR and the expression of OVA mRNA was detected by ELISA.