Immune escape and exhaustion attributing to development of PTLD

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当該年度の実績として、引き続きEBV関連T/NK細胞性リンパ増殖性疾患（EBV-NK-LPD）の病態解明を目的としたsingle cell RNA seq（scRNAseq）実験技術と解析方法の確立が挙げられる。本計画は当初、移植後EBV関連リンパ増殖性疾患に対する免疫応答を中心とした病態解明を目的とし、3年間の計画で申請したが、2021年度に競合する研究結果が報告されたことで研究計画の大幅な見直しが必要となった。また新型コロナウイルスの流行による影響で研究活動が制限されたり、当初予定していたeffortが確保できなかったりした影響により全体としての研究状況は当初の予定より遅れているため、研究期間の延長申請を行った。もともとは特に免疫応答の破綻メカニズムの解明を目的として、モデルマウスを使用した研究計画を開始したが、初年度に、モデルの疾患再現性の問題から免疫応答の評価が困難であったことを報告し、2020年より、EBV-T/NK-LPDにおけるリンパ増殖メカニズムの解明を主目的として研究を継続している。2022年度は疾患活動度の異なる患者から得たEBV感染NK 細胞の解析を目的としてscRNAseqを行い、EBV感染細胞における多様性や特徴について解析を試みた。解析を進める中で、scRNAseq解析によるEBV関連遺伝子の遺伝子の検出感度が著しく低い可能性が示唆されたため、in-situ hybridization flow cytometry法でEBV感染細胞の割合を比較したところscRNAseq解析ではEBV感染細胞の偽陰性が多くみられることが分かった。今後non-coding RNA の検出効率を上げるため、scRNAseq実験方法を一部変更しデータ集積に努める予定である。