卵巣キスペプチンの周排卵期における機能形態学的解析　～臨床応用への分子基盤確立～

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神経ペプチドであるkisspeptinは主に視床下部に発現しておりGnRH/LHの放出を介して雌では卵胞発育や排卵に関わっている。kisspeptinおよびkisspeptin受容体は卵巣にも発現しているが、その機能についてはほとんど明らかとなっていない。生殖医療においてkisspeptinはhCGなどと同様に排卵誘起製剤としての働きが期待されているが、卵巣への影響は明らかとなっていないため、本研究ではkisspeptin投与による過排卵処置後の卵巣への影響を明らかにすることを目的とした。はじめに卵巣のkisspeptinの発現の変化を可視化するため組織化学的手法の確立を試みた。脳サンプルの免疫染色に使用していた２種類の抗kisspeptin抗体を用いて、１次抗体の濃度、抗体の反応時間と温度、賦活化の有無、賦活化のpHについて検討を行った。また各性周期の卵巣とhCGによる過排卵処理した動物の卵巣を用いて、過去の報告と発現の変化が一致するのかを確認した。免疫染色について様々な条件で検討を行ったが、卵巣で明らかな染色像は得られなかった。賦活化のpHを変えることで、陽性細胞と思われる像は確認されたが、過去の報告から多く発現していると思われる時期と免疫染色による発現変化が一致しなかった。卵巣に発現するエストロゲン受容体β（ERβ）の陽性反応は得られた。kisspeptinの発現が多いと思われるサンプルで明らかな染色像が免疫染色では得られなかったことから、in situ hybridizationを用いてmRNAの染色を行った。脳サンプルは染まるが、卵巣では明らかなシグナルを検出できなかった。これまで、免疫染色・in situ hybridization法を用いて検討をおこなってきたが、過去の論文で報告されているような染色像は得られなかった。これらの結果から、卵巣のkisspeptinの発現量は脳と比べて、かなり低い可能性が考えられた。今後は、染色の条件検討を行うとともに、PCRなどを用いた遺伝子発現解析についても検討する予定である。