Multidimensional Analysis of operationally tolerance in living donor liver transplant patients

活体肝移植患者手术耐受性的多维度分析

• 批准号: 20H00544
• 负责人: 奥村 康
• 金额: $ 29.62万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H00544/
• 关键词: 免疫寛容; 肝移植; 拒絶反応; 制御性T細胞; 移植免疫

肝生検サンプルを用いた多重蛍光免疫染色パネルの開発を行った。連携するピッツバーグ大学移植病理部で既に確立されている染色パネルを参考に、制御性T細胞と細胞傷害性T細胞の区別するパネル、線維化の進展を評価できるパネル、炎症性/抑制性マクロファージ(M1/M2)を評価できるパネルにおける分子ターゲットを検討し、抗体選定と染色の条件検討を実施した。肝生検の組織に発現するRNAシークエンスによる遺伝子解析と、浸潤するリンパ球をシングルセルでRNAシークエンス解析するために十分な検体量を検討し、生検針太さ(ゲージ)と必要な長さを決定した。また、多施設でのサンプリングのため、生検サンプルの遺伝子や細胞内の遺伝子の安定性を検討し、約12時間以内であれば、浸潤細胞のシングルセル解析をも実施可能であることが判明した。肝生検を用いずに潜在的な免疫拒絶反応を予測するリキッドバイオプシー法を検討した。これまでドナーリンパ球を用いた抗ドナー免疫応答性を評価するリンパ球刺激試験が主であったが、ドナーリンパ球の持続的な確保が困難な症例があり、ドナーリンパ球のうち、HLAクラス１とクラス２が十分に発現するB細胞に着目し、ドナーB細胞を拡大培養し、安定した抗原刺激ソースとして用いることを確立した。これにより、ドナー抗原に応答したT細胞の細胞分裂回数がCFSE染色を併用することで評価することが可能となり、今後免疫寛容に至った患者において実施できる。

Multiplex immunostaining was used to detect liver cancer. The Department of Transplantation Pathology of the University of Beijing established the reference for staining, differentiation between inhibitory T cells and cytotoxic T cells, evaluation of the progress of linear maintenance, evaluation of the inflammatory/inhibitory (M1/M2), molecular screening, antibody selection and staining conditions. The amount of RNA detected in the tissue of the liver, the amount of RNA detected and the amount of RNA detected. The stability of the gene and the gene in the cell can be detected within about 12 hours after the treatment. The analysis of the gene in the infiltrated cell can be realized. The potential for immune rejection is discussed in the context of liver regeneration. The immune response of B cells in vitro was evaluated by the immune response test. The immune response of B cells in vitro was evaluated by the immune response test. The immune response of B cells in vitro was evaluated by the immune response test. The immune response of B cells in vitro was evaluated by the immune response test. The number of cell divisions of T cells in response to this antigen and CFSE staining is evaluated in the future and administered in patients with immune tolerance.

项目成果

肝移植後の免疫抑制剤使用及び免疫寛容樹立に係る全国調査報告

全国肝移植术后免疫抑制剂使用及免疫耐受建立情况调查报告

• 发表时间: 2021
• 作者: Yusuke Yoshimatsu;Yohei Mikami;Takanori Kanai;松本龍
• 通讯作者: 松本龍