Analysis of metastasis and growth of melanoma cells under irradiation of specific light exposure with Gq mutation

Gq突变特定光照射下黑色素瘤细胞的转移和生长分析

• 批准号: 20H03849
• 负责人: 橋川 和信
• 金额: $ 11.32万
• 依托单位: Nagoya University (2021-2023)Kobe University (2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03849/
• 关键词: メラノーマ; Gq; 青色光; メラノプシン; 光受容; 転移; OPN4

虹彩に発生する悪性黒色腫(以下Melanoma)のうち、遠隔転移を起こした群ではGタンパク質ファミリーのうちGqαサブユニット群(以下Gq)の遺伝子変異が高率に認められること、また動物実験により、Gq遺伝子変異株ではMAPキナーゼ系の活性化(細胞増殖の活性化)および有意に転移をきたしたことが報告された。その後、Melanomaのみならず消化器系や呼吸器系に発生した悪性腫瘍においても同様の知見が報告されつつある。本研究の目的は、光とMelanomaの関連においてこれまで示されてきた「光線暴露が発生の危険因子である」ことに加え、「光線暴露は増殖・転移の危険因子でもある」ことを細胞生物学的に示すことにある。われわれは2つのMelanoma細胞株(MEWO株およびG361株)を研究対象として選んだ。昨年度までにGnaqをターゲットにR138Q変異の導入を行うためのCRISPR/CAS9を用いたベクターの配列およびssODNの配列(1塩基置換)を設計した。本年度はこれらをエレクトロポーレーションにより同時にMEWO株およびG361株に導入を行い、変異導入を確認するためにゲノム配列に対してPCRを行い、制限酵素処理ないしはGuide-it Mutation Detection Kitを用いて確認したが、いずれも切断が見られず、変異導入が否定された。次に、guide RNAを合成し、ssODNおよびCAS9タンパクを混じたものをエレクトロポーレーションし、Guide-it Mutation Detection Kitにより切断を確認したところ、MEWO株において一部切断が行われていることが確認でき、つまり、編集が行われたことが確認された。現在、限界希釈法によりクローンのスクリーニングを行なっている。

In the case of rainbow development, the genetic diversity of melanomas (hereinafter Melanoma) is high, and the genetic diversity of melanomas (hereinafter Gq) is high. The genetic diversity of melanomas (hereinafter Melanoma) is high, and the genetic diversity of melanomas (hereinafter Gq) is high. The genetic diversity of melanomas (hereinafter Gq) is high, and the genetic diversity of melanomas (hereinafter Gq) is high. After that, Melanoma and its digestive system and respiratory system developed into sexual tumors, and the same knowledge was reported The purpose of this study is to demonstrate the relationship between light and Melanoma by adding "light exposure increases risk factors for proliferation and migration" to cell biology. 2 Melanoma cell lines (MEWO strain and G361 strain) were selected for the study. Last year, Gnaq was designed to introduce R138Q into CRISPR/CAS9 and to use it in the design of ssODN (1-base substitution). This year, we will introduce MEWO strain and G361 strain to confirm the Mutation. Next, guide RNA synthesis, ssODN, CAS9, Guide-it Mutation Detection Kit, and MEWO strain were identified. Now, the limit of the search method to select the search method to select the search method.