膵癌の転移・播種において生着を可能にする因子の同定

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本年度は、昨年度に引き続き、膵癌細胞株を用いて、膵癌のコラーゲンIとの接着・増殖におけるITGA2の機能について検証した。まず、ITGA2の恒常的ノックダウンのために、レトロウイルスベクターを用いたITGA2-shRNAを作成した。次に、同ITGA2-shRNAをITGA2の発現の高いPK－1株と、ITGA2の発現の低いMIAPaca2株にトランスフェクションし、ITGA1恒常的ノックダウン株を作成し、表現型の確認を行なった。その結果、ITGA2をノックダウンしたPK－１株では増殖能の低下を認めたが、コラーゲンIとの接着能の低下は明らかではなかった。ITGA2ノックダウンによるMIAPaca2では同様の効果は明らかではなかった。今後は、RNAシーケンス解析を行い、ITGA2ノックダウンの有無、コラーゲンI添加の有無での遺伝子発現プロファイルの違いを明らかにし、ITGA2ノックダウンによる分子学的な変化の解明を試みる予定である。また膵癌切除標本において膵癌細胞でのITGA2の発現を確認したところ、ITGA2の発現が高い膵癌は無再発生存期間、全生存期間が有意に短い結果を得た、これはThe Cancer Genome Atlasの膵癌データセットを用いた解析でも同様の結果であった。しかしながら、転移臓器や腹膜播種の発症には有意な差は認めなかった。膵癌患者からCirculating tumor cell (CTC)を採取・培養し、同定した蛋白質の有無での生存率・増殖能の評価に関しては、本年度はCTCの安定した採取・培養方法の確立には至っておらず、次年度以降も手技確立含め、継続して行なっていく予定である。