脂肪組織における抗肥満ターゲット分子UCP1の発現調節機構に関する研究

抗肥胖靶分子UCP1在脂肪组织中的表达调控机制研究

基本信息

批准号：
20J14356
负责人：
川原崎聡子
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J14356/
关键词：
UCP1 レポーターアッセイ CRISPR/Cas9 スクリーニング分泌型ルシフェラーゼ

项目摘要

本研究では、脂肪組織のミトコンドリアに存在し、熱産生を介して全身のエネルギー消費に寄与する脱共役タンパク質1 (UCP1) の発現調節に寄与する遺伝子を探索し、新規UCP1発現調節遺伝子を見出すことを目的としている。本年度は、前年度に作製した、UCP1転写活性が培養上清のルシフェラーゼ活性測定により評価可能な白色脂肪組織由来レポーター脂肪細胞株 (Ucp1-secNLuc iWAT) を用いてUCP1転写調節に寄与する遺伝子のスクリーニングを行った。作製したレポーター細胞株に対してCRISPR/Cas9ノックアウトガイドRNAライブラリーを導入し、1細胞につき1種のガイドRNAを有するUcp1-secNLuc iWATを作製した。ライブラリーを導入したUcp1-secNLuc iWAT 1000個からなる細胞集団計1942個に対してβ-アドレナリン受容体アゴニストisoproterenol (iso) 添加前後のluciferase活性を測定した。その結果、非刺激時のUCP1転写活性またはisoへの応答性が変化した細胞集団が見出された。活性が変化した細胞集団に含まれるガイドRNAの種類と比率を推定するため、ゲノムDNA上のライブラリー由来配列に対して次世代シーケンス解析を行った結果、1つの細胞集団中に約1000種のガイドRNAが様々な比率で含まれていることが確認された。このガイドRNAの中で、特定の活性変化を示した細胞集団において増加したガイドRNAの種類を特定するため、大阪大学大学院情報科学研究科の松田秀雄教授、瀬尾茂人准教授らの協力のもと統計学的解析を行ったところ、13種のガイドRNAが有意に増加しており、これらのガイドRNAが標的とする遺伝子が非刺激時のUCP1転写活性またはβ-アドレナリン刺激に対する応答性の調節に寄与する候補遺伝子として選抜された。

这项研究旨在通过搜索脂肪组织线粒体中存在的基因来找到一种新型的UCP1表达调节基因，并有助于调节解偶偶联蛋白1（UCP1）的表达，从而有助于通过热生成的系统性能量支出。在今年，我们筛选了使用白色adipo组织衍生的记者脂肪细胞系（UCP1-Secnluc IWAT）筛选有助于UCP1转录调节的基因，该基因可以通过测量培养上士的Luciferase活性来评估，这可以评估上一年。将CRISPR/CAS9敲除指南RNA库引入了生成的报告基细胞系中，以生成UCP1-Secnluc IWAT，该细胞iWat具有一个指导RNA。在添加β-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素（ISO）之前和之后的荧光素酶活性，总共测量了由1,000个UCP1-核含IWAT细胞组成的1,942个细胞，这些细胞已引入了该文库。结果，发现了一个细胞群，其中不改变UCP1转录活性或对ISO的响应性发生了改变。为了估计活性改变的细胞群中包含的指南RNA的类型和比率，对基因组DNA的图书馆衍生序列进行了下一代测序分析，并证实，单个细胞种群中约有1,000个指导RNA包含在各种比例中。为了确定表现出特定活动变化的细胞人群中增加的指南RNA类型，与Matsuda Hideo教授和副教授Seo Shigeto合作进行了统计分析，大阪大学和其他人的Seo Shigeto，并发现13个指导RNA的临时rnas的基因是候选人的候选人，该指南的基因是RN的候选人，该基因是RNE的基因，该基因是RNA的基因RNAS，该基因是RNAS的基因RNAS，该基因是RNAS的基因RNAS，并将其作为RNS的基因rna，而RN是RNAS的基因。在不刺激过程中对β-肾上腺素能刺激的活性或反应能力。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

生細胞で評価可能な高感度UCP1レポーター前駆脂肪細胞株の樹立

建立可在活细胞中进行评估的高度敏感的 UCP1 报告基因前脂肪细胞系

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
川原崎聡子;鄭惠芬;高橋春弥;野村亘;神戸大朋;井上和生;河田照雄;後藤剛
通讯作者：
後藤剛

レポーター前駆脂肪細胞株を用いた新規UCP1発現調節遺伝子の探索

使用报告前脂肪细胞系寻找新的 UCP1 表达调节基因

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
川原崎聡子;瀬尾茂人;Huei-Fen Jheng;高橋春弥;野村亘;神戸大朋;松田秀雄;井上和生;河田照雄;後藤剛
通讯作者：
後藤剛

Screening of flavor compounds using <i>Ucp1</i>-luciferase reporter beige adipocytes identified 5-methylquinoxaline as a novel UCP1-inducing compound

使用<i>Ucp1</i>-荧光素酶报告基因米色脂肪细胞筛选风味化合物，鉴定出 5-甲基喹喔啉是一种新型 UCP1 诱导化合物

DOI：
10.1093/bbb/zbab216
发表时间：
2021
期刊：
Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
影响因子：
0
作者：
Kawarasaki Satoko;Matsuo Kazuki;Kuwata Hidetoshi;Zhou Lanxi;Kwon Jungin;Ni Zheng;Takahashi Haruya;Nomura Wataru;Kenmotsu Hisanori;Inoue Kazuo;Kawada Teruo;Goto Tsuyoshi
通讯作者：
Goto Tsuyoshi

蛍光強度を指標とした非侵襲的UCP1レポーターマウスの作出

以荧光强度为指标，无创生成UCP1报告小鼠