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脂肪組織における抗肥満ターゲット分子UCP1の発現調節機構に関する研究

抗肥胖靶分子UCP1在脂肪组织中的表达调控机制研究

基本信息

批准号：
20J14356
负责人：
川原崎聡子
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J14356/
关键词：
UCP1 レポーターアッセイ CRISPR/Cas9 スクリーニング分泌型ルシフェラーゼ

项目摘要

本研究では、脂肪組織のミトコンドリアに存在し、熱産生を介して全身のエネルギー消費に寄与する脱共役タンパク質1 (UCP1) の発現調節に寄与する遺伝子を探索し、新規UCP1発現調節遺伝子を見出すことを目的としている。本年度は、前年度に作製した、UCP1転写活性が培養上清のルシフェラーゼ活性測定により評価可能な白色脂肪組織由来レポーター脂肪細胞株 (Ucp1-secNLuc iWAT) を用いてUCP1転写調節に寄与する遺伝子のスクリーニングを行った。作製したレポーター細胞株に対してCRISPR/Cas9ノックアウトガイドRNAライブラリーを導入し、1細胞につき1種のガイドRNAを有するUcp1-secNLuc iWATを作製した。ライブラリーを導入したUcp1-secNLuc iWAT 1000個からなる細胞集団計1942個に対してβ-アドレナリン受容体アゴニストisoproterenol (iso) 添加前後のluciferase活性を測定した。その結果、非刺激時のUCP1転写活性またはisoへの応答性が変化した細胞集団が見出された。活性が変化した細胞集団に含まれるガイドRNAの種類と比率を推定するため、ゲノムDNA上のライブラリー由来配列に対して次世代シーケンス解析を行った結果、1つの細胞集団中に約1000種のガイドRNAが様々な比率で含まれていることが確認された。このガイドRNAの中で、特定の活性変化を示した細胞集団において増加したガイドRNAの種類を特定するため、大阪大学大学院情報科学研究科の松田秀雄教授、瀬尾茂人准教授らの協力のもと統計学的解析を行ったところ、13種のガイドRNAが有意に増加しており、これらのガイドRNAが標的とする遺伝子が非刺激時のUCP1転写活性またはβ-アドレナリン刺激に対する応答性の調節に寄与する候補遺伝子として選抜された。

The purpose of this study is to explore the mechanism of the regulation of the development of UCP1 and to discover the mechanism of the regulation of UCP1 development. This year, compared with the previous year, UCP1 gene expression activity was measured in culture supernatant, and UCP1 gene expression activity was measured in culture supernatant to evaluate the possible origin of white adipose tissue and adipose cell line (UCP1-secNLuc iWAT). CRISPR/Cas9 is introduced into a cell line and UCP1-secNLuc iWAT is produced Luciferase activity was measured before and after the introduction of isoproterenol (iso) into a cell population of 1942 cells from 1000 cells. The results showed that UCP1 mRNA activity during non-stimulation and responsiveness to iso levels increased in cell groups. The ratio of RNA species and RNA species in the active cell population was estimated and determined by DNA sequencing analysis. The ratio of RNA species and RNA species in the active cell population was estimated to be about 1000 species. A collaborative statistical analysis of 13 types of RNA was conducted by Professor Hideo Matsuda and Associate Professor Shigeto Seo, Graduate School of Information Science, Osaka University. The target gene is UCP1 gene activity in the non-stimulated state, and the candidate gene is selected from the regulatory state in response to β-stimulation.

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

生細胞で評価可能な高感度UCP1レポーター前駆脂肪細胞株の樹立

建立可在活细胞中进行评估的高度敏感的 UCP1 报告基因前脂肪细胞系

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
川原崎聡子;鄭惠芬;高橋春弥;野村亘;神戸大朋;井上和生;河田照雄;後藤剛
通讯作者：
後藤剛

ヒストンのアセチル化を介した白色脂肪細胞の UCP1 発現制御機構の解析

组蛋白乙酰化调控白色脂肪细胞UCP1表达的机制分析

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
川原崎聡子;YULIANA Ana;JHENG Huei-Fen;野村亘;高橋春弥;荒武;井上和生;河田照雄;後藤剛
通讯作者：
後藤剛

Screening of flavor compounds using <i>Ucp1</i>-luciferase reporter beige adipocytes identified 5-methylquinoxaline as a novel UCP1-inducing compound

使用<i>Ucp1</i>-荧光素酶报告基因米色脂肪细胞筛选风味化合物，鉴定出 5-甲基喹喔啉是一种新型 UCP1 诱导化合物

DOI：
10.1093/bbb/zbab216
发表时间：
2021
期刊：
Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
影响因子：
0
作者：
Kawarasaki Satoko;Matsuo Kazuki;Kuwata Hidetoshi;Zhou Lanxi;Kwon Jungin;Ni Zheng;Takahashi Haruya;Nomura Wataru;Kenmotsu Hisanori;Inoue Kazuo;Kawada Teruo;Goto Tsuyoshi
通讯作者：
Goto Tsuyoshi

蛍光強度を指標とした非侵襲的UCP1レポーターマウスの作出

以荧光强度为指标，无创生成UCP1报告小鼠