がん細胞の近接細胞を蛍光標識する新規技術を用いた骨転移ニッチの解明

がんの転移において、がん細胞と転移先臓器由来細胞の相互作用からなる転移ニッチが、がん細胞の生存や増殖を制御すると考えられている。これまでに、既存のマーカーを用いて転移ニッチ構成細胞は同定されつつあるが、未知の細胞種が関与する可能性もあり、網羅的な解析が必要とされる。そこで、研究開始当初は、自ら開発したがん細胞の近接細胞を蛍光標識する遺伝子コード型技術HUNTERをマウス骨転移モデルに応用することで、骨転移ニッチ構成細胞を生体外へ単離し、解析することで、骨転移の分子機構の解明を目的としていた。新型コロナウイルスにより、HUNTERレポーター発現トランスジェニックマウスの作出に遅延が生じたため、アデノ随伴ウイルスにより肝臓特異的にHUNTERレポーターを発現させ、肝転移モデルでの転移ニッチに解析対象を変更し、肝転移ニッチ構成細胞の解析を実施した。まず、マウス肝臓にアデノ随伴ウイルスでHUNTERレポーターを送達することで、肝細胞特異的にレポーターが発現することと、対応するHUNTERレポーター発現がん細胞を脾臓から移植することで、転移腫瘍近傍肝細胞がHUNTERで標識されたことを確認した。次に、肝臓から標識肝細胞を効率よく単離する最適な条件を検討し、酵素処理時間を短縮して、HUNTERによる蛍光標識に対する酵素による影響を最小限にするなどした。以上の検討から得た条件で、肝転移モデルでの転移ニッチ構成肝細胞をHUNTERで蛍光標識し、単離した。単離した肝転移ニッチ構成肝細胞を1細胞RNAシーケンス法で解析した結果、先行研究での報告と一致した結果が得られていることを確認するとともに、転移ニッチ構成肝細胞とがん細胞から遠位の肝細胞の間に特徴的な遺伝子発現の違いがあることを見出し、特徴的な遺伝子発現を免疫組織化学染色法で検証した。これらの結果をまとめて、論文投稿を準備中である。

がんの転移において、がん細胞と転移先臓器由来細胞の相互作用からなる転移ニッチが、がん細胞の生存や増殖を制御すると考えられている。これまでに、既存のマーカーを用いて転移ニッチ構成細胞は同定されつつあるが、未知の細胞種が関与する可能性もあり、網羅的な解析が必要とされる。そこで、研究開始当初は、自ら開発したがん細胞の近接細胞を蛍光標識する遺伝子コード型技術HUNTERをマウス骨転移モデルに応用することで、骨転移ニッチ構成細胞を生体外へ単離し、解析することで、骨転移の分子機構の解明を目的としていた。新型コロナウイルスにより、HUNTERレポーター発現トランスジェニックマウスの作出に遅延が生じたため、アデノ随伴ウイルスにより肝臓特異的にHUNTERレポーターを発現させ、肝転移モデルでの転移ニッチに解析対象を変更し、肝転移ニッチ構成細胞の解析を実施した。まず、マウス肝臓にアデノ随伴ウイルスでHUNTERレポーターを送達することで、肝細胞特異的にレポーターが発現することと、対応するHUNTERレポーター発現がん細胞を脾臓から移植することで、転移腫瘍近傍肝細胞がHUNTERで標識されたことを確認した。次に、肝臓から標識肝細胞を効率よく単離する最適な条件を検討し、酵素処理時間を短縮して、HUNTERによる蛍光標識に対する酵素による影響を最小限にするなどした。以上の検討から得た条件で、肝転移モデルでの転移ニッチ構成肝細胞をHUNTERで蛍光標識し、単離した。単離した肝転移ニッチ構成肝細胞を1細胞RNAシーケンス法で解析した結果、先行研究での報告と一致した結果が得られていることを確認するとともに、転移ニッチ構成肝細胞とがん細胞から遠位の肝細胞の間に特徴的な遺伝子発現の違いがあることを見出し、特徴的な遺伝子発現を免疫組織化学染色法で検証した。これらの結果をまとめて、論文投稿を準備中である。