DNAクロマトグラフィーによる簡便迅速な人獣鑑別 : 分子生物学的な咬傷解析法の開発

使用 DNA 色谱法简单快速地识别人类与动物：开发分子生物咬痕分析方法

• 批准号: 19H00318
• 负责人: 加藤 優子
• 金额: $ 0.35万
• 依托单位: 兵庫県警察本部刑事科学捜査研究所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19H00318/
• 关键词: イヌ唾液; 咬傷

近年、しばしばペットによる咬傷トラブルが話題になることがあるが、所属している科学捜査研究所でも例外ではなく、相談を受けることがある。しかし、客観的に咬傷の事実を証明するには、現在では咬傷痕と被疑動物の歯型の形態学的な比較が主であるが、咬傷痕が付く皮膚や衣服は変形性に富み、比較は難しい。また、発生件数が多いイヌは、唾液中のアミラーゼ活性が非常に低いため、咬傷部位に残る唾液のアミラーゼを指標とする検査が適用できず、咬傷痕の不鮮明な咬傷を科学的に証明することも困難であった。近年、咬傷部位のイヌの唾液をmRNAマーカーによる分子生物学的検査で検出する方法が報告されたが、科捜研の鑑定実務(資料からDNAを抽出しDNA型検査を行う)の流れを考慮すると、別にmRNAを抽出・逆転写反応してリアルタイムPCRで解析する系は、貴重な資料を追加消費する上、方法がやや煩雑で試薬・解析機器の維持もコストがかかる課題がある。そこで、実務に適用可能な分子生物学的な咬傷解析法の開発を目指し、資料からDNAとRNAを共抽出し、イヌの唾液を既報のイヌ唾液特異的mRNAマーカーを利用して、高額な解析機器を必要としないDNAクロマトグラフィーを用いた簡便な検査系を確立することを目的として本研究を計画した。本研究により、これまで解析が困難であった咬傷痕の不鮮明なイヌによる咬傷事例に対し、科捜研の実務レベルで適用可能な有効な咬傷解析法を提供することが可能となる。方法としては、【1】イヌ試料(唾液、対照として尿・皮膚片)の収集、【2】試料からのDNA・RNAの抽出、【3】cDNAの合成、【4】安価なendpoint PCRで標的cDNAを増幅、併せてリアルタイムPCRによりmRNAマーカーの発現量の確認やイヌDNAの定量等、【5】DNAクロマトグラフィーによる検出、を予定していた。都合により、【1】までしか達成できなかったが、収集した資料及び試薬は、今後、本研究の続きにおいて無駄なく使用予定である。

In recent years, the Institute of Scientific Research has been an exception to the rule of law. A comparison of the morphology of the bite wound and the shape of the suspected animal's skin and clothing is made. The number of bites is high, the activity of saliva is very low, the bite site is residual, the saliva is not clear, the bite site is not clear, and the scientific proof is difficult. In recent years, the bite site of saliva mRNA detection and identification of molecular biological methods for the detection of reports, scientific research and research The problem of how to consider the flow of DNA from data extraction to DNA typing, how to extract mRNA from reverse transcription, how to analyze PCR system, how to add valuable data, and how to maintain the analyzer. This study aims to establish a simple DNA detection system that can be used in molecular biology for the development of DNA and RNA co-extraction, and for the utilization of saliva specific mRNA. This study provides information on the possible application of bite analysis methods to the analysis of bite injuries. Methods: [1] Sample collection (saliva, urine and skin),[2] Sample extraction of DNA and RNA,[3] cDNA synthesis,[4] Amplification of cDNA target by endpoint PCR, and identification of mRNA production and DNA quantification,[5] DNA detection and determination. All of them were collected, and the data were collected. In the future, there will be no use for this study.