悪性固形腫瘍における顆粒球系コロニー刺激因子受容体の発現

粒细胞集落刺激因子受体在恶性实体瘤中的表达

基本信息

批准号：
06770136
负责人：
加藤優子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的・方法】腫瘍の産生する増殖因子が腫瘍細胞自身に作用し、増殖を刺激するというAutocrine機構は種々のin vitro実験系で提唱されてきたが、実際にin vivoの固形腫瘍でこの現象を明らかにした研究はない。本研究では、G-CSF産生腫瘍の増殖・悪性転化機構が腫瘍細胞より自律性に産生されるG-CSFのAutocrine機構によって説明でき得るかを考察することを目的とし、腫瘍細胞上のG-CSFRの発現を、RT-PCR法、in situ receptor binding法などの手法を用いて、遺伝子・蛋白レベルで検討することを目的とした。我々は既にヒトG^CSF産生ヌードマウス移植腫瘍株10株を樹立・同定済みであり、今回これら10株のヒトG-CSF産生ヌードマウス移植腫瘍株について、RT-PCR法を用いてG-CSF受容体(Granulocyte Colony-Stimulating Factor Receptor,G-CSFR)の産生・発現を検討した。G-CSFR遺伝子発現はG-CSF産生ヌードマウス移植腫瘍材料より精製・抽出したRNAを鋳型にし、G-CSFR遺伝子に特異的なプライマーを用いたRT-PCR法(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)を行い、G-CSFR遺伝子の発現を検討した。【結果】RT-PCR法により胎盤及びヒト悪性リンパ腫由来細胞株(U937)を用いてG-CSFR遺伝子の発現が同定可能であることを確認した。in situ RT-PCR法によりG-CSFR遺伝子転写産物の同定を試みたが、腫瘍細胞上に直接G-CSFR遺伝子転写産物を確認・同定することはできなかった。そこで、G-CSFRの細胞表面上での発現を腫瘍材料組織切片に、蛍光標識G-CSFを用いたin situ receptor binding法を施し、免疫組織化学的に検討中である。また、G-CSF産生腫瘍を担癌させたヌードマウス固体に、既に作製済みの抗G-CSF抗体を投与し、抗G-CSF抗体投与による治療実験を行ったが、腫瘍の増殖速度の変化は起こらなかった。

[客观/方法]在各种体外实验系统中提出了产生肿瘤生长因子对肿瘤细胞本身作用并刺激生长的自分泌机制，但实际上没有研究揭示了体内实体瘤中的这种现象。这项研究旨在考虑是否可以通过G-CSF的自分泌机制来解释产生G-CSF的生长和恶性转化机制，G-CSF的自分泌机制是由肿瘤细胞自主产生的，其目的是研究使用诸如RT-PCR和spar-pcr和spoctun int inspcr and ins ins intsun and Intun and Intun and Inting and the Gene和蛋白质的G-CSFR在基因和蛋白质水平上的表达。我们已经建立并确定了10个产生的裸小鼠肿瘤菌株的10个人类G^CSF，我们现在研究了这10个使用RT-PCR的人G-CSF受体（G-CSFR）的产生和表达。对于G-CSFR基因的表达，使用对G-CSFR基因的引物进行了纯化的RNA并使用G-CSF产生的裸小鼠从裸鼠移植的肿瘤材料中提取，并检查了RT-PCR（RT-PCR），并检查了G-CSFR基因的表达。 [结果]通过RT-PCR证实，可以使用胎盘和人类恶性淋巴瘤衍生的细胞系来鉴定G-CSFR基因的表达（U937）。尽管我们试图通过原位RT-PCR鉴定G-CSFR基因转录本，但我们无法直接鉴定肿瘤细胞上的G-CSFR基因转录本。因此，使用荧光标记的G-CSF在肿瘤材料组织切片上进行了原位受体结合方法研究了G-CSFR在细胞表面上的表达。此外，使用已经制备的抗G-CSF抗体进行了具有癌症伴有G-CSF的癌症的固体裸小鼠，并使用抗G-CSF抗体给药进行了治疗实验，但肿瘤生长速率没有变化。