悪性固形腫瘍における顆粒球系コロニー刺激因子受容体の発現

粒细胞集落刺激因子受体在恶性实体瘤中的表达

• 批准号: 06770136
• 负责人: 加藤 優子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770136/
• 关键词: 顆粒球コロニー刺激因子; 顆粒球コロニー刺激因子受容体; autocrine機構; 同形腫瘍; ヌードマウス; RT-PCR

【目的・方法】腫瘍の産生する増殖因子が腫瘍細胞自身に作用し、増殖を刺激するというAutocrine機構は種々のin vitro実験系で提唱されてきたが、実際にin vivoの固形腫瘍でこの現象を明らかにした研究はない。本研究では、G-CSF産生腫瘍の増殖・悪性転化機構が腫瘍細胞より自律性に産生されるG-CSFのAutocrine機構によって説明でき得るかを考察することを目的とし、腫瘍細胞上のG-CSFRの発現を、RT-PCR法、in situ receptor binding法などの手法を用いて、遺伝子・蛋白レベルで検討することを目的とした。我々は既にヒトG^CSF産生ヌードマウス移植腫瘍株10株を樹立・同定済みであり、今回これら10株のヒトG-CSF産生ヌードマウス移植腫瘍株について、RT-PCR法を用いてG-CSF受容体(Granulocyte Colony-Stimulating Factor Receptor,G-CSFR)の産生・発現を検討した。G-CSFR遺伝子発現はG-CSF産生ヌードマウス移植腫瘍材料より精製・抽出したRNAを鋳型にし、G-CSFR遺伝子に特異的なプライマーを用いたRT-PCR法(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)を行い、G-CSFR遺伝子の発現を検討した。【結果】RT-PCR法により胎盤及びヒト悪性リンパ腫由来細胞株(U937)を用いてG-CSFR遺伝子の発現が同定可能であることを確認した。in situ RT-PCR法によりG-CSFR遺伝子転写産物の同定を試みたが、腫瘍細胞上に直接G-CSFR遺伝子転写産物を確認・同定することはできなかった。そこで、G-CSFRの細胞表面上での発現を腫瘍材料組織切片に、蛍光標識G-CSFを用いたin situ receptor binding法を施し、免疫組織化学的に検討中である。また、G-CSF産生腫瘍を担癌させたヌードマウス固体に、既に作製済みの抗G-CSF抗体を投与し、抗G-CSF抗体投与による治療実験を行ったが、腫瘍の増殖速度の変化は起こらなかった。

Objective: To investigate the effect of tumor growth factors on tumor cell proliferation and its mechanism in vitro and in vivo. The aim of this study is to investigate the expression of G-CSFR in tumor cells, RT-PCR, in situ receptor binding, and gene protein expression in tumor cells. 10 G-CSF producing strains were established and identified. 10 G-CSF producing strains were identified and identified by RT-PCR. G-CSFR gene development was studied by Reverse Transcriptase-Polymerase Chain reaction (RT-PCR) in the study of G-CSF production, purification, RNA extraction, and G-CSFR gene specificity. [Results] RT-PCR confirmed the possibility of identical expression of G-CSFR gene in placenta and placenta derived cell line (U937) Identification of G-CSFR gene expression products by RT-PCR in situ and identification of direct G-CSFR gene expression products on tumor cells G-CSF was detected on the cell surface of tumor tissue sections and stained with G-CSF by situ receptor binding and immunohistochemical staining. G-CSF produces tumor cells, and the growth rate of tumor cells increases with the administration of anti-GCSF antibodies.