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宿主免疫による黄色ブドウ球菌の増殖抑制を促す乳房炎ワクチン用新規抗原の探索

寻找乳腺炎疫苗的新抗原，通过宿主免疫促进抑制金黄色葡萄球菌生长

基本信息

批准号：
19J11689
负责人：
古川睦実
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J11689/
关键词：
黄色ブドウ球菌乳房炎宿主抗体

项目摘要

ウシ乳房炎は黄色ブドウ球菌などの病原微生物が引き起こす感染症であり、酪農現場に甚大な被害をもたらす。治療のための抗生物質の使用は乳汁の出荷停止や薬剤耐性菌の出現の原因となるため、薬剤に頼らない疾病防除が重要であり、特にワクチンの質の向上が必須である。先行研究では、既存の乳房炎ワクチンを模倣し、黄色ブドウ球菌(死菌)をウシに免疫することで産生される、黄色ブドウ球菌の様々な分子を認識する抗体の中で、黄色ブドウ球菌の増殖そのものを直接的に制御する、中和活性を有した抗体が含まれているか否かを検証してきた。その結果、黄色ブドウ球菌特異的ウシIgG抗体との共培養により、黄色ブドウ球菌のCFU数が有意に減少するという結果を得ていた。本研究の目的は黄色ブドウ球菌特異的ウシIgG抗体による黄色ブドウ球菌の増殖抑制に関与する抗原を同定し、ウシ乳房炎のワクチン抗原へと応用することであった。今年度は、黄色ブドウ球菌特異的抗体（抗SA抗体）による増殖抑制効果が、抗体を構成する中で、どのような領域によって引き起こされるかを明らかにした。IgG抗体はFabとFcの２つのフラグメントで構成され、抗体の特異性を決定する領域はFab領域に存在する。そこで、まず、抗SA抗体をFab断片とFc断片に切断するために、Pepsinで処理した。無処理、Buffer置換後（Pepsin処理前）、Pepsin処理後の抗SA抗体をSDS-PAGEに供することで、Pepsin処理により、Fab断片とFc断片に抗体が切断されたことを確認した。次に、黄色ブドウ球菌を植菌した培地中に、抗SA抗体およびPepsin処理後の抗SA抗体を添加し、黄色ブドウ球菌に対する増殖抑制効果を検証した。その結果、Pepsin処理を行っても増殖抑制効果が確認され、抗SA抗体による増殖抑制効果がFab領域によるものであることが示された。

Mastitis, yellow mastitis, cocci, pathogenic microorganisms, infectious diseases, cheese markets, victims, infections, cocci, cocci, mastitis, yellow mastitis, cocci and pathogenic microorganisms. For the treatment of anti-biological agents, the use of milk to stop the occurrence of resistant bacteria, the prevention and control of diseases is very important, and it is necessary to improve the quality of disease. The first step is to study the virus, the existing mastitis virus, the model of mastitis, the immune system of cocci (dead bacteria), the immunity of cocci, the molecular knowledge of antibodies, the direct control of antibodies, and the neutralization activity of antibodies. The results showed that the specific IgG antibodies of Flavobacterium were co-cultured and the number of CFU of Xanthomonas flavus was intentionally decreased. The purpose of this study was to detect the specific IgG antibodies of cocci, the colonization inhibition of cocci, the same as that of antigens, mastitis, antigens, antigens and antigens. This year, the antibody (anti-SA antibody) of anti-Flavobacterium specific antibody (anti-Escherichia coli) shows that the colonization inhibition results, the antibody becomes positive, and the field of infection is very important. IgG antibody "Fab" Fc "2", antibody "specific" determines the existence of Fab domain. Anti-SA antibodies, Fab fragments, Fc fragments, Pepsin fragments. After Buffer treatment (before Pepsin treatment), anti-SA antibody SDS-PAGE after Pepsin treatment, Pepsin treatment, Fab fragment, Fc fragment, antibody cut, anti-SA antibody, anti-SA antibody, anti-SA antibody After the treatment of anti-SA antibody, anti-SA antibody and anti-SA antibody. The results showed that the results of Pepsin assay confirmed that the colonization inhibition of anti-SA antibody was confirmed, and that of anti-Fab antibody showed significant difference in the field of Fab.